第三军医大学学报2000年第22卷第4期

张荣华周子成洪多伦艾九松

摘要： 目的探讨三七对四氯化碳(CCl₄)中毒性肝纤维化的防治作用。方法复制大鼠CCl₄中毒性肝纤维化模型，并以秋水仙碱作为阳性治疗对照。采用光镜、电镜观察组织学改变，测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、白蛋白、球蛋白、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量，以反映肝细胞损伤及肝纤维化程度。将形态改变与功能变化相结合，对比分析三七对 cCl₄中毒性肝纤维化的防治作用。结果三七治疗后肝细胞损害、肝脏脂肪变性、炎细胞浸润的程度均较轻，成纤维细胞和胶原纤维增生亦较少。结论：三七对肝细胞损伤有一定保护作用，并可明显抑制肝组织中成纤维细胞及胶原纤维增生，是较理想的防治肝纤维化的药物。

关键词：肝纤维化；三七；透明质酸；层粘连蛋白；病理学；大鼠

肝纤维化造成肝功异常，影响肝病预后，是慢性肝病发展至肝硬化的必经阶段。因此，防治肝纤维化具有重要意义。目前，国内外尚缺乏理想的抗肝纤维化的药物，中医中药的应用具有广阔的前景。为探讨三七的抗肝纤维化作用，我们采用四氯化碳(Carbon tetrachlor ide,CCl₄)中毒诱导的大鼠肝纤维化模型，研究三七对某些血清学指标、肝组织羟脯氨酸(Hydroxypro-line,Hyp)含量变化和肝组织病理形态改变的影响，并与秋水仙碱的抗肝纤维化作用进行对比分析，为进一步研究三七防治肝纤维化作用和机制及指导临床应用提供理论依据。

1材料与方法

1.1实验动物

健康雄性Wistar大鼠107只，SPF级，体重180～210 g，由第三军医大学动物中心提供。

1.2药物及其配制

生三七粉(贵阳中药厂)制成3%、6%、12%混悬液，秋水仙碱(法国HOUDE实验室)制成0.0025%混悬液，4°C保存。

1.3肝纤维化模型

每只大鼠首次后腿皮下注射纯CCl₄(重庆化学试剂厂)0.05 ml/kg，以后注射40%C Cl₄橄榄油0.03 ml/kg(V/V)，每周2次，共9周。

1.4动物分组及给药

将实验动物随机分为4组：①空白对照组(Control group)，大鼠接受橄榄油(上海卫辉化学试剂厂)后腿皮下注射，首次0.05 ml/kg，以后0.03 ml/kg，每周2次。同时予0.5%羧甲 基纤维素钠溶液经口灌胃，5 ml/kg，1/d。②肝纤维化模型组(Model)。③秋水仙碱组(Colc hicine)。模型组和秋水仙碱组在造模的同时分别予0.5%羧甲基纤维素钠、0.0025%秋水仙碱灌胃，5 ml/kg，1/d。④三七组(Panax notoginseng，PN)，在预实验取得最佳剂量后，造模的同时予12%三七粉灌胃，5 ml/kg，1/d。

1.5标本采集

各组每隔3周处死8只大鼠，最后一次处死大鼠为第9周末。用3%戊巴比妥钠腹腔注射0.02 ml/kg，麻醉后，经股动脉放血，分离血清，-20°C保存。留取肝组织标本。

1.6检测指标及方法

1.6.1应用EX₇全自动生化测定仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferas e,ALT)、白蛋白(Albumin)、球蛋白(Globulin)含量。

1.6.2应用上海第二军医大学海军医学研究所提供的透明质酸(Hyaluronic acid,HA)、层 粘连蛋白(Laminin,LN)放免试剂盒，按说明操作，测定HA、LN含量。

1.6.3肝组织Hyp含量按许志勤法^［1］进行测定。

1.6.4病理形态学观察常规HE染色观察肝组织学改变，Van gieson胶原纤维染色观察胶原纤维增生情况，电镜观察肝脏超微结构变化。

1.7统计学处理

采用第三军医大学医用数理统计程序进行统计学处理。

2结果

2.1大鼠一般情况

对照组处死前均存活，每只体重增加(128±47)g。模型组实验中死亡7只，至9周处死前，每只体重增加(34±29)g，显著低于空白对照组(P＜ 0.05)。秋水仙碱组实验中死亡4只 ，每只体重增加(62±23.6)g，显著低于空白对照组(P＜0.01)而高于模型 组(P＜ 0.05 )。三七组实验中无死亡，与模型组比较P＜0.05，每只体重增加(87±36) g，显著高于模型组(P＜ 0.01)。死亡者均未列入统计。

2.2三七对实验大鼠肝功能的影响

模型组、秋水仙碱组、三七组不同时相ALT含量均显著高于同期空白对照组(P＜ 0.01 ，P＜ 0.05)，而以模型组最高，显著高于其它同期各组(P＜0.01)。9周时，三七组A LT低于秋水仙碱组(P＜ 0.05)。模型组不同时相白蛋白下降、球蛋白增加，与其它各组比 较差异显著(除秋水仙碱组6周外)，而9周时三七组球蛋白显著低于秋水仙碱组(P＜0.05)， 见表1。

表1各组大鼠肝功能变化(±s,n=8)

tab 1Changes of liver function in different

groups of rats(±s,n=8)

Group ALT(IU/L) Albumin(ρ_B/g·L^-1) Globulin(ρ_B/g·L^-1) Control week3 38.47±4.39 34.51±1.69 24.19±1.57 week6 37.59±5.32 35.09±1.87 23.78±1.45 week9 39.63±5.13 35.55±2.09 24.01±1.62 Model week3 225.38±99.78^** 31.24±1.92^** 27.76±2.20^** week6 312.63±72.21^** 27,82±2.93^** 30.78±1.88^** week9 348.63±90.75^** 24.41±2.81^** 36.52±1.09^** Colchicine week3 58.38±12.68^**△△ 33.86±2.62^△ 24.14±2.25^△△ week6 90.2±58.26^*△△ 32.10±3.97^* 24.78±2.09^△△ week9 110.0±37.55^**△△ 32.41±1.96^△△ 26.45±2.60^*△△ PN week3 67.13±18.39^**△△ 34.83±1.58^△△ 24.01±2.50^△△ week6 97.63±38.59^**△△ 34.35±1.54^△ 23.91±1.88^△△ week9 68.12±14.34^**△△# 34.50±2.74^△△ 23.88±1.69^△△#

^*：P＜0.05,^**：P＜0.01 vs control；^△：P＜0.05,^△△：P＜0.01 vs model；#：P＜0.05 vs Colchicine

2.3三七对大鼠血清HA、LN和肝组织中Hyp的影响

各组大鼠不同时相血清HA、LN、肝Hyp均较空白对照组有不同程度升高，但3周时均无显著性差异，6周时秋水仙碱组Hyp升高及三七组3项指标升高无统计学意义，各组以9周时3项指标升高(除三七组Hyp外)最为明显，而2个药物治疗组6、9周时各项指标显著低于同期模型组(除秋水仙碱组6周时血HA、9周时肝Hyp外)，见表2。

表2大鼠血清HA、LN和肝组织Hyp的变化(±s,n=8)

tab 2Levels of HA、LN in serum and Hyp in liver tissue

in different groups of rats(±s,n=8)

Group HA(ρ_B/μg*L^-1) LN(ρ_B/μg*L^-1) Hyp(mg/g) Control week3 97.32±15.28 32.47±5.01 2.01±0.39 week6 98.45±16.03 33.38±4.56 2.22±0.41