第四军医大学学报2000年第21卷第4期

章梅夏天张仲海靳风烁颜真崔大祥

摘要：目的观察四君子汤对脾虚患者血浆细胞因子的影响，探讨脾虚与细胞因子的关系.方法66例脾虚患者分为四君子汤治疗组和六味地黄汤治疗组,采用免疫分析技术对脾虚患者 及其血浆IL-2,IL-2R,IL-4,IL-5,TNF-α，IgE,sICAM-1等细胞因子水平进行测定，用逆转录聚合酶链反应技术(RT- pCR) 对外周淋巴细胞IL-4 mRNA，IL-5 mRNA表达进行定量分析，用斑点杂交法检测外周血CD₂ mRNA.结果脾虚患者IL-2,IL-4,IL-5,TNF-α,IgE水平下降，sI CAM-1和sIL-2R水平升高，外周淋巴细胞IL-4 mRNA，IL-5 mRNA和CD₂ mRNA弱表达， 表现为免疫 功能下降，经过四君子汤治疗，上述各项指标恢复正常.结论四君子汤可通过益气健脾调节细胞因子的水平和功能,从而达到增强免疫功能的作用.

关键词：脾虚患者；四君子汤；细胞因子；医学,中国传统

0引言

脾虚证见于临床诸多疾病，四君子汤是补气健脾的代表方，主要用于治疗脾虚证.我们对脾虚患者外周血中的细胞因子及部分细胞因子受体进行检测，对一些细胞因子的基因表达状况进行研究，同时并用四君子汤进行反证治疗，和六味地黄汤进行对比研究，以对四君子汤的健脾机制能有进一步的认识.

1对象和方法

1.1对象所选患者66例，为本院中医科门诊与住院患者，均符合脾虚证辨证 参考标准^［1］，即纳差、乏力，食后或午后腹胀，便溏，消瘦，面色不华，舌淡苔白，脉虚无力，具备3 项. 以上病程在0.5 a以上. 将66例脾虚患者随机分为，四君子汤治疗组(SJZ)和六味地黄汤治疗 组(LWD). 四君子汤治疗组33例，年龄32～59岁，平均(48±8)岁.六味地黄汤治疗组33例， 年龄31～61岁，平均(47±8)岁，2组资料具有可比性.正常对照组15(男8，女7)例，均 来自本院血库健康献血者.

1.2方法

1.2.1给药方法受试者停用中西药物2 wk，采用双盲给药法，经配对的患者按随机数字表达法分为脾虚组和六味地黄汤治疗组，由专人发药，服药剂量为200 mL/次,2 次/d，早晚空腹服用，疗程5～6 wk，给药前后复查指标.四君子汤：人参48 g，白术36 g， 茯苓36 g，炙甘草18 g，水煎分装200 mL/袋，水煎液浓度60 g·L^-1，本院中药房.六味地黄汤，熟地48 g，山药36 g，山萸36 g，丹皮36 g，泽泻18 g，茯苓18 g，水煎分装 ，200 mL/袋，水煎液浓度60 g·L^-1，对照组为水煎液.以上两种药物在外观及包装 方面均一致.

1.2.2测定方法早晨8∶00空腹抽肘静脉血，分装于2支肝素抗凝管内，一支试管立即分离血 浆，-20℃冻存，一支即刻分离淋巴细胞，Hanks液洗2次，用于 cD₂ mRNA, IL-4 mRNA,I L-5 mRNA测定. 采集动脉血用于sICAM-1测定. sIL- 2R 采用ELISA法，试剂购自深圳晶 美生物工程公司，光密度测定用奥地利产STL全自动酶标分析仪. IL-4，IL-5采用ELISA法，人基因 重组IL-4,IL-5，鼠抗人IL-4, IL-5单抗和生物素标记二抗为靳风烁博士惠赠，HRP标 记的 链亲和素与生物素化二抗形成复合物450 nm测A(OD)值.血清sICAM-1采用酶联免疫吸 附法测定，试剂由本校免疫教研室提供. IL-2，IgE，TNF-α等采用放射免疫法测定，IL-2试剂 购自 上海安迪生物工程公司，IgE购自美国DPL公司，TNF-α购自北京东亚免疫技术研究所，用芬 兰产多探头全自动计数仪检测. CD₂基因探针由靳风烁博士惠赠，CD₂ mRNA，测定采用 斑点杂交法,杂交结果用HPVectra PC微机图像处理系统进行光密度扫描，用曝光斑点的平 均光密度 值(A值)面积代表外周血淋巴细胞CD₂ mRNA 相对含量. iL-4,IL-5 mRNA测定采用RT -PCR 法，将淋巴细胞用Hank′s洗涤2次，后移至1.5 mL Eppendorf管中，按酚-氯仿常规步骤进 行RNA提取^［2］，按美国 promega公司提供的逆转录PCR试剂盒进行操作，产物10 μ L在32 g·L^-1琼脂糖 凝胶上电泳，IL-4产物117 bp，IL-5产物113 bp，β-actin作为内参照，用薄层扫描仪 ( cs-9000，日本)检测DNA含量，计算每标本IL-4/β-actin, iL-5/β-actin PCR 扩 增产物(DNA)比值以表达强弱.

统计学处理:检测结果以均值±标准差表示，组间比较用方差分析和Q 检测法，每组治疗前后自身比较用t检验

2结果

四君子汤对脾虚患者外周血中细胞因子水平变化的影响见Tab1,四君子汤对脾虚患者外周血 淋巴细胞CD₂ mRNA，IL-4/β-actin, iL-5/β-actin DNA值的影响见Tab 2。

表 1四君子汤对脾虚患者外周血中细胞因子水平变化的影响

tab 1Effect of Sijunzi decoctum on plasma cytokines in Pixu patien ts(X±s)

Group IgE(IU/ mL) IL-2(IU·L^-1) sIL-IR(U·L^-1) IL-4( ng·L^-1) IL-5( ng·L^-1) sICAM-1(μg·L^-1) TNF-α (IU·L^-1) Normals 381±132 9.8±3.2 294±93 544±213 430.2±185.4 1.31±0.17 2.8±0.14 Pixu 142±24^bd 7.5±2.1^bd 655±80^bd 218±89 bd 120.6±74.3^bd 4.65±0.68^bd 1.6±0.32^bd SJZ 439±146 13.9±1.8^a 279±88 676±146^a 528.9± 120.6^b 1.27±0.14 3.9±0.17^a LWD 145±63^bd 6.8±1.9^bd 679±74^bd 220±96 ^bd 118.3±95.4^d 4.57±0.53^bd 1.5±0.28^bd

^aP＜0.05，^bP＜0.01 vs normals,^cP＜0.05,^dP＜0.01 vs SJZ; SJZ:Sijunzi tang (chinese herb); LWD:Liuweidihuang tang(chinese herb).

表 2四君子汤对脾虚患者外周血淋巴细胞CD₂ mRNA，

iL-4/β-actin, IL-5 /β-actin DNA值的影响

tab 2Effect of SijunZi decoctum on CD₂ mRNA，

iL-4/β-actin,IL-5/β-actin in Pixu patients(X±s)

Group CD₂ mRNA IL-4/β-actin IL- 5/β-actin relativ e r1 coefficient r2 Normals 26.7±2.4 0.89±0.41 0.77±0.32 0.28 0.19 Pixu 43.8±5.9^bd 0.33±0.17^bd 0.25±0.11^bd 0.65^b 0.73^b SJZ 25.8±4.3 1.03±0.52^a 0.98±0.15^a LWD 44.1±4.5^bd 0.34±0.23^bd 0.29±0.22^bd

^aP＜0.05，^bP＜0.01 vs normals,^cP＜0.05,^dP＜0.01 vs S JZ; SJZ,LWD:the same as Tab 1 r1 is IL-4/IL-5DNA，r2 is IL-5/IL-5DNA

3讨论

脾在中医基础理论中为后天之本，气血生化之源，与机体的免疫功能和营养状况有关，脾运失常，消化障碍，就会导致食欲不振，腹泻，消瘦，气血生化不足，导致免疫力下降，机体抵抗力下降. IL-2,sIL-2R和CD₂是淋巴细胞活化的重要标志.我们曾在以往的 研究中 观察到脾虚患者外周血辅助性T细胞(Th)减少，抑制性T细胞(Ts)升高，T细胞分化能力下降^{［3 ］}IL-2主要是由Th细胞在抗原丝裂原刺激下和IL-1诱导下分泌的，Ts细胞抑制IL-2产生，IL- 2具有促进细胞增殖，促进T细胞杀伤的作用，能增强巨噬细胞，NK细胞活性，调节T细胞和B细胞的分化与增殖^［4,5］sIL-2R能以低亲和力结合IL-2，可与淋巴细胞膜上的IL-2R竞争IL-2，从而抑制IL-2对淋巴细胞的增殖刺激作用，中和细胞周围的IL-2，减弱机体的自分泌效 应而起类似封闭因子的作用^［6］.正常人血清中存在少量sIL-2R. 人淋巴细胞CD 2分子是参与细胞粘附和活化的重要糖蛋白分子，CD₂参与T细胞活化，T细胞被激活，CD₂ mRNA水 平上升 ，激活受抑制状态下降^［7］.我们研究表明， 脾虚患者血浆IL-2和CD₂ mRNA水平下降，sIL-2 R水平明显升高，提示脾虚患者外周淋巴细胞处于抑制状态，活化的T细胞静息下来，从而 表现为脾虚患者免疫功能低下.

T细胞对B淋巴细胞合成IgE具<