第四军医大学学报2000年第21卷第5期

赵燕玲夏天

摘要： 目的探讨脾虚证与胃窦及十二指肠组织的5-HT及其受体的关系.方法成年SD大鼠30只随机分为3组. A组：脾虚组(n=10)；B组：对照组(n=10)；C组：四君子汤治疗组(n=10).采用免疫组化和医学图像分析系统相结合的方法，测定各组大鼠胃窦及十二指肠5-HT细胞的数目、面积、平均灰度、细胞内5-HT含量及5-HT受体阳性细胞内5-HT受体的含量.结果①A组大鼠胃窦5-HT细胞的数目(106±8)·HP^-1，面积(35.1±4.0)μm²，5-HT含量(0.337±0.050) AU，5-HT受体含量(0.345±0.075) aU均高于B组(P＜0.05或P＜0.01)，平均灰度(120±8)较B组降低(P＜0.05或P＜0.01)；A组大鼠十二指肠5-HT细胞的数目（109±5）·HP^-1，面积（30.2±2.2）μm²，5-HT含量（0.341±0.031） AU，5-HT受体含量（0.319±0.031） aU均高于B组（P＜0.01）,平均灰度（123±4）较B组降低（P＜0.01）.②C组的上述指标测定结果与B组无显著差异.结论胃窦及十二指肠组织5-HT及其受体含量的增高可导致消化系统功能紊乱，有可能是脾虚证的一种重要病因或病机.

关键词：脾虚证；5-羟色胺；5-羟色胺受体；幽门窦；十二指肠

0引言

中医“脾”与消化系统关系密切，脾虚时消化系统的功能处于紊乱状态^［1］.5-羟色胺（5-hydroxytrypatamine, 5-HT)作为体内一种重要的神经递质和调节物，在胃肠系统分布最多(多分布于胃窦及十二指肠)，约占体内总量的90%，5-HT与其特异性受体(5-HT receptor, 5-HTR)相结合，对消化系统功能起着重要的调节作用，如胃肠运动、胃酸和粘液的分泌、局部粘膜血流量等^［2］.脾虚时血液及脑组织内5-HT含量增高^［3,4］，全胃粘膜5-HT细胞数目增多^［5］，但有关脾虚证与胃窦及十二指肠组织的5-HT及5-HT受体的相关性研究，尚未见报道.我们拟通过观察脾虚大鼠胃窦及十二指肠的5-HT细胞、5-HT含量、5-HTR含量的变化，探讨脾虚证与胃窦及十二指肠组织5-HT及5-HT受体的相互关系.

1材料和方法

1.1材料大黄水煎剂，单味生大黄组成，浓缩煎至质量浓度为1 kg·L^-1，本院中药房煎制；四君子汤煎剂，由党参、白术、茯苓、炙甘草4味中药按2∶2∶2∶1的质量比例组成，浓缩煎至质量浓度为4 kg·L^-1，本院中药房煎制；兔抗鼠5-HT抗体及抗5-HT受体抗体，购于本校组织胚胎学教研室，使用效价为1∶1000和1∶200；兔ABC试剂盒，购于武汉博士德公司；医学图像分析系统，本校秦都口腔医学院病理科提供，型号HPIAS1000，同济医科大学千屏影像工程公司生产； 正常成年SD大鼠30只，购自本校实验动物中心，雌雄各半，体质量（200±5） g，随机分为3组，每组10只.

1.2方法造模方法参照王秀琴的方法^［6］.脾虚组(A)：灌服大黄水煎剂，3 mL，2次·d^-1 (10：00,16：00),连续9 d. 正常对照组(B)：灌服蒸馏水3 mL，2次·d^-1（10：00，16：00），连续9 d；四君子汤治疗组(C)：前9 d造脾虚模型，方法同A组，然后灌服四君子汤煎剂，3 mL，2次·d^-1 (10：00,16：00),连续9 d.各组动物饲养环境相同，饮食不限，造模结束后禁食16 h，脊椎脱臼法处死，取胃窦组织、胃与十二指肠交界下1 cm处1 cm长的十二指肠组织各1块，生理盐水洗净胃内容物.所有标本经100 mL·L^-1中性福尔马林液固定，脱水，石蜡包埋，制备成4μm厚的连续切片. 采用ABC法进行免疫组化染色，染色步骤参照免疫组化ABC试剂盒说明书. 阴性对照用PBS代替一抗.取免疫组化标记的含有5-HT及5-HTR免疫反应阳性细胞的每张切片在高倍镜(10×40)下，随机将5个视野的图像由电视摄像系统输入图像分析系统(MIPS)的主计算机，由主计算机系统进行图像处理，检测5-HT细胞的数目、面积及胞体平均灰度值，其中平均灰度无特定的计量单位.同时使用图像分析仪中的光密度计测量5-HT及5-HTR免疫反应阳性细胞内5-HT及5-HTR的含量，用任意单位（arbitrary unit, AU）表示.

统计学分析： 所有数据均以平均数±标准差(X±s)表示，以组间t检验进行统计学处理.

2结果

2．15-HT细胞的变化A组胃窦及十二指肠组织5-HT细胞数目、面积的数值明显高于B组(P＜0.05或P＜0.01)，平均灰度值低于B组(P＜0.05或P＜0.01).平均灰度在图像分析中用来表示图像的透光率，分为256级，最黑为0级，最亮为256级. 5-HT细胞的平均灰度值越小，说明其免疫组化染色越深，即细胞内5-HT含量越高（Tab1）.

表1胃窦及十二指肠组织5-HT细胞的变化

tab 1Changes of 5-HT cells in gastric antral and duodenal tissues(n=10,X±s)

Group Gastric antrum Duodenum Number Square／μm² Grey level Number Square／μm² Grey level A: Spleen-asthenia 106±8 35.1±4.0 120±8 109±5 30.2±2.2 123±4 B: Control 80±7^b 30.3±2.1^b 131±7^b 96±5^b 26.9±2.3^b 134±6^b C: Sijunzi decoction 84±5^b 31.4±2.2^a 128±8^a 97±3^b 27.3±2.5^a 130±2^b

^aP＜0.05, ^bP＜0.01 vs A.2．25-HT,5-HTR含量的变化A组胃窦及十二指肠组织5-HT，5-HTR含量均明显高于B组(P＜0.05或P＜0.01)；C组胃窦及十二指肠组织5- hT，5-HTR含量明显低于A组(P＜0.05或P＜0.01)，但与B组相比无显著性差异（Tab2).

3讨论

5-HT是体内重要的神经递质和调节物，在胃肠系统含量最多，约占体内总量的90%，其受体主要分布于胃肠的粘膜上皮、腺上皮、粘膜下神经组织、肌间神经组织及平滑肌等处^［7，8］. 5-HT与其受体相互作用，对消化系统功能起着重要的调节作用，给动物注射5-HT,发现外源性的5-HT可加快肠道蠕动，使大鼠便量增多，小鼠腹泻，以上作用可被5-HTR拮抗剂抑制^［9］.此外，外源性的5-HT还具有抑制胃酸及胃蛋白酶的分泌，促进胃内容物的运输，参与肠液电解质的转运作用^［2，10］.而中医学“脾”的主要生理功能及病理表现与现代医学消化系统的关系密切，中医学认为“脾主运化”，即指脾对饮食物具有消化和吸收的功能.脾虚时脾失健运，则机体的消化、吸收、运输等功能减退，据此我们推测脾虚证与胃肠道5-HT及其受体的含量变化可能有密切联系.

表2胃窦及十二指肠组织5-HT，5-HTR含量的变化

tab 2Changes of the contents of 5-HT,

5-HTR in gastric antral and duodenal tissues(n=10, X±s, aU)

Group Gastric antrum Duodenum 5-HT 5-HTR 5-HT 5-HTR A: Spleen-asthenia 0.337±0.050

0.345±0.075

0.341±0.031 0.319±0.031 B: Control 0.268±0.058^a 0.271±0.011^b 0.306±0.015^b 0.287±0.010^b C: Sijunzi decoction 0.292±0.019^a 0.290±0.027^a 0.310±0.033^a 0.291±0.026^a

^aP＜0.05, ^bP＜0.01 vs A.本实验结果表明，脾虚时胃窦及十二指肠组织的5-HT细胞数目增多，面积增大，平均灰度值降低，5-HT及5-HTR含量增加.由于胃肠道5-HT具有抑制胃酸和胃蛋白酶的分泌，加快胃肠道收缩和蠕动等作用，此结果提示脾虚时出现的纳差，腹泻等典型的消化功能紊乱的症状与胃肠道内源性5-HT及其受体含量的增高有关.对脾虚时胃肠道5-HT细胞-胃肠道内源性5-HT-5-HTR这一链条各个环节进行的客观、定量的分析，证实脾虚证与胃肠道内源性5-HT及其受体确有密切联系.

四君子汤是健脾益气的经典代表方.经四君子汤治疗后，大鼠的脾虚症状有较大改善，其胃肠道内源性5-HT及5-HTR的含量较脾虚时明显降低，与正常组相比无显著性差异.一方面通过四君子汤的治疗，反证了脾虚模型制造成功，另一方面从胃肠道5-HT及其受体与脾虚证的关系这一角度验证了四君子汤的健脾益气，改善消化系统功能的作用.

本研究结果表明，胃窦及十二指肠组织5-HT和5-HT受体含量的增高可能是脾虚证的重要病机.

基金项目：国家自然科学基金资助项目（39270864)

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