中国中医眼科杂志1999年第9卷第4期

金威尔张俊华林颖张国安

摘要目的：研究清开灵注射液、α-干扰素 ( α- interferon, α - INF )和γ-干扰素(γ-interferon, γ-INF )对翼状胬肉成纤维细胞体外增殖的影响。方法：用组织培养技术建立翼状胬肉成纤维细胞系。用MTT比色法测定清开灵注射液、α-INF和γ-INF对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响。结果：清开灵注射液、α-INF和γ-INF可以明显抑制翼状胬肉成纤维细胞的增殖，并呈剂量依赖效应。结论：清开灵注射液、α-INF和γ-INF均能有效抑制体外翼状胬肉成纤维细胞的生长。

关键词：翼状胬肉清开灵成纤维细胞α-干扰素γ-干扰素

翼状胬肉是眼科的常见多发病，但对其病变本质及发病机理仍有争议，临床至今也缺少根治的理想疗法。故研究其病变本质及寻找有效的防治措施，是目前急需解决的课题之一，病理学研究表明，翼状胬肉的主要成份是大量增生的成纤维细胞，并由其导致相应的病变^〔1〕。近年来，清开灵在眼科临床上越来越受到重视，并用于许多眼病的治疗^〔2，3〕。从1998年5月～12月我们对清开灵注射液、α-干扰素(α-interferon,γ- iNF)和γ-干扰素(α-interferon,γ-INF)对翼状胬肉成纤维细胞体外增殖的影响进行了研究，希望能为临床治疗翼状胬肉提供新的有效的方法。

1材料与方法

1.1 材料

RPMI1640培养基为美国Gibco公司产品；胎牛血清为北京邦定公司产品，清开灵注射液系北京 中医学院实验药厂产品，α-INF由深圳兴科公司生产；γ-INF由第二军医大学提供；MTT系Fluka公司产品；DMSO、胰蛋白酶为Sigma公司产品。

1.2方法

1.2.1 翼状胬肉成纤维细胞的培养：培养组织取自 1998年5～12月本院眼科手术切除的原发性翼状胬肉标本，采用组织培养技术^〔4〕，建立翼状胬肉成纤维细胞株，实验所用细胞为第3～5代细胞。

1.2.2测定不同浓度的清开灵注射液、α-INF和 γ -INF对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响：将贴壁培养的翼状胬肉成纤维细胞用0.25%胰蛋白酶消化后，接种于96孔培养板(Linbro)中，贴壁后加入含有不同浓度的清开灵注射液、α-INF和γ-INF的无血清RPMI1640培养液。对照组只加培养液，每组设3复孔，培养48h，吸出培养液，加入经浓度为0.05%的MTT，继续培养6h，用PBS冲洗两次后加入DMSO振荡混匀，用酶联免疫测定仪(美国Bio-Rad)测定570nm处吸光度值A。

1.2.3 统计学处理：所有结果均以x±s表示，组间比较采用配对t检验。

2结果

2.1不同浓度清开灵注射液对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响

10%～40%终浓度的清开灵注射液均可显著抑制成纤维细胞的增殖，且呈剂量依赖效应，见表1。

表1清开灵对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响

组别 药物浓度(%) A值(x±s) t值 P值 对照组 0 0.316±0.01 — — 清开灵 1 0.312±0.02 2.167 ＞0.05 10 0.297±0.02 2.724 ＜0.05 20 0.251±0.03 3.221 ＜0.05 30 0.228±0.01 4.106 ＜0.01 40 0.185±0.02 4.385 ＜0.01

2.2 不同浓度的α-INF和γ-INF对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响

α-INF 10²～10⁴u/ml，γ-INF 10²～10⁴u/ml，均可显著抑制成纤维细胞增殖，且均呈剂量依赖效应，见表2。

表2干扰素对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响

组别 细胞因子

浓度(u/ml) A值(x±s) t值 P值 对照组 0 0.316±0.01 — — α-INF组 10 0.318±0.02 2.324 ＞0.05 10² 0.282±0.02 2.665 ＜0.05 10³ 0.261±0.02 3.177 ＜0.05 10⁴ 0.164±0.01 4.782 ＜0.01 γ-INF组 10 0.274±0.03 2.801 ＜0.05 10² 0.236±0.02 4.099 ＜0.01 10³ 0.185±0.02 4.385 ＜0.01 10⁴ 0.127±0.01 5.124 ＜0.01

3讨论翼状胬肉的病因仍不明确，目前治疗仍以手术切除为主，但术后复发率较高，寻找高效低毒的防止翼状胬肉术后复发的药物是一项重要课题。清开灵是以安宫牛黄丸为基础配方提取而成的复方中药制品，主要成份有牛黄、水牛角、黄芩、金银花、杞子等，有清热解毒、化痰、祛痰通络、醒脑开窍之功效^〔3〕。据资料记载本药有显著的抗炎免疫作用，这种抗炎免疫作用类似于环胞霉素，且与之协同^〔5〕。

干扰素是一组由淋巴细胞、成纤维细胞经诱导产生的糖蛋白，它可以作用于纤维化过程的多个环节，可调节成纤维细胞的功能，可有效地治疗纤维性疾病^〔6〕；还能抑制成纤维细胞的趋化和增殖，从而抑制胶原的合成和分泌^〔7〕。在本研究中，清开灵注射液、α-INF和γ-INF均能明显抑制翼状胬肉成纤维细胞的体外增殖活性，且均呈剂量依赖效应，提示清开灵、α-INF和γ-INF三者可能是一组有效的防治翼状胬肉复发的药物，且没有丝裂霉素、5-Fu等抗代谢药物的毒性，因此，具有极好的临床应用前景。

作者单位：金威尔、张俊华、林颖：福建中医学院附属人民医院眼科(福州350004)

张国安：中国人民解放军第476医院临床免疫研究室

参考文献

1Hill J C,Maske R.Pathogenesis of ptergium.Eye，1989，3：218

2池珍儿，胡谷冰.口服清开灵防止翼状胬肉术后复发的疗效观察.中国中医眼科杂志，1996，

6：97

3宋立.清开灵在眼科的应用示例.中国中医眼科杂志，1993，3：231

4鄂征.组织培养技术.第2版.北京：北京人民出版社，1993，125

5胡土星，李绍珍.葡萄膜炎的治疗(综述与译文).国外医学*眼科学分册，1990，14：260

6顾金文.细胞因子与内眼术后纤维形成的关系.国外医学*眼科学分册，1995，19：51

7顾宝文.细胞因子与内眼术后纤维形成的关系.国外医学*眼科学分册，1995，19：51