北京中医药大学学报1999年第1期

陶虹李小粤刘朝晖裴霞李夏林指导：蒋玉凤王谦

摘要采用尾静脉注射大肠杆菌内毒素复制大鼠内毒素休克模型，检测动物血压、脑系数、海马组织一氧化氮合酶(NOS)活性及海马CA1区形态学改变，探讨心脉灵注射液对内毒素休克大鼠的作用机理。结果显示：与病理组相比，注入心脉灵注射液后1h、6h，动物血压上升，脑系数下降，海马组织NOS活性显著增高，海马CA1区神经元损伤明显减轻，动物无死亡。提示心脉灵注射液能够改善内毒素休克所致的低血压及脑水肿，保护海马CA1区神经元，增强海马组织NOS活性，起到抗内毒素休克的作用。

关键词：心脉灵注射液 内毒素休克 一氧化氮合酶 海马 大鼠

心脉灵注射液是在四逆汤基础上研制成的注射液，具有回阳救逆，益气固脱的功效。研究表明^［1,2］，它对狗、兔、大鼠等内毒素休克有显著疗效。本实验着重检测内毒素休克大鼠海马组织一氧化氮合酶(NOS)活性，观察海马CA1区神经元形态变化，以及心脉灵注射液对其的影响，为阐明心脉灵注射液抗休克的作用机制提供实验依据。

1材料与方法

1.1材料

雄性Wistar大鼠(北京医科大学实验动物中心提供)，体重140～200g；大肠杆菌内毒素(北京生物制品所提供，批号：810011)；心脉灵注射液(北京中医药大学制剂教研室提供)；RBP-1型大鼠尾压心率测定仪(中日友好医院临床医学研究所提供)；NOS活性试剂盒(军事医学科学院放射医学研究所提供，批号：970825)；紫外分光光度计(HITACHI，U-2000)。

1.2方法

1.2.1模型制备：实验动物禁食1d，随机分为3组。正常组：尾静脉一次推注生理盐水10mL/kg，5min后再注射1次，剂量同前；病理组：将10mg/kg大肠杆菌内毒素溶于10mL/kg生理盐水中，尾静脉推注，5min后再注入同等剂量的生理盐水；治疗组：按10mL/kg注入心脉灵注射液，5min后再给予内毒素，剂量与方法同病理组。

1.2.2血压测定：用RBP-1型大鼠尾压心率测定仪测量造模后1h、6h大鼠尾动脉血压。

1.2.3大鼠海马组织NOS活性测定：大鼠分别于造模1h、6h杀检、取脑，冰浴下分离脑组织，取海马200mg。组织样品按200g/L加入40mmol/LpH7.2磷酸钾缓冲液中，匀浆，10000r/min离心20min，取上清液，加入反应底物L-Arg、NaDPH等，立即计时、振荡，分别在401nm、421nm波长下测定每一样品的OD值，同时每隔30s记录1次，最后计算出每克组织每分钟产生的一氧化氮(NO)量，即NOS活性。

1.2.4脑系数测定：脑组织称重，按脑湿重/体重×100%计算。

1.2.5海马CA1区神经元形态检测：取大鼠脑组织冠状切面，20%福尔马林固定，石蜡切片，HE染色，光镜下观察。

1.2.6死亡率检测：按各组动物6h死亡数/各组动物数×100%计算。

1.2.7统计学处理用x±s表示检测结果，用t检验法比较组间差异的显著性。

2实验结果

2.1心脉灵注射液对内毒素休克大鼠血压的影响

实验前大鼠平均血压为(18.30±0.56)kPa(n=25)，注入内毒素后血压呈不可逆性下降，1h降至(4.40±2.72)kPa，6h降为(3.36±3.36)kPa，与实验前相比有显著差异(P＜0.001)；治疗组血压回升，1h升至(10.42±2.61)kPa，6h继续上升到(12.22±3.10)kPa(各组均为n=5)，病理组6h死亡率为57.14%，其余组无死亡。

2.2心脉灵注射液对内毒素休克大鼠海马组织NOS活性的影响

病理组1h、6h海马组织NOS活性迅速降低，与正常组比较有显著差异(P＜0.001)，随着休克的发展，NOS活性呈下降趋势；治疗组1h、6hNOS活性较病理组明显升高(分别为P＜0.01、P＜0.001）。见表1。

表1心脉灵注射液对内毒素休克大鼠海马组织NOS活性的影响(nmol/(min．g)；x±s；n=5)

组别

NOS活性 1h 6h 正常组 0.6218±0.0719 病理组 -0.3109±0.0777^*** -0.4275±0.0719^*** 治疗组 0.1166±0.0991^**△ 0.3109±0.0777^*△△

注：与正常组比较*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001；

与病理组比较△P＜0.01△△P＜0.001

2.3心脉灵注射液对内毒素休克大鼠脑系数的影响

正常组1h脑系数为0.93±0.01，病理组1h、6h脑系数分别为1.05±0.05，1.09±0.04，均显著高于正常组(P＜0.05)；用心脉灵注射液治疗后，脑系数呈持续降低趋势；1h、6h分别为1.03±0.06，1.00±0.06，与病理组比较差异不明显(各组均为n=5)。

2.4心脉灵注射液对内毒素休克大鼠海马CA1区神经元形态结构的影响

光镜下，正常组CA1区神经元呈复层排列，细胞形态正常；病理组1h变化不明显，6h可见神经元排列紊乱，有的出现核固缩、核碎裂、空泡变性，部分神经元肿胀、溶解、脱失成为鬼影细胞，并有神经细胞被噬现象，血管与周围组织间隙加宽；治疗组CA1区神经元排列整齐，细胞结构基本正常，神经元周围组织未见明显异常，6h比1h有更明显的改善。

3讨论

用静脉注射内毒素的方法复制大鼠休克模型，结果显示动脉血压呈不可逆下降。动物表情淡漠，四肢厥冷，呼吸微弱，相当于中医厥证的阳气衰微型，进一步发展可导致死亡。用心脉灵注射液治疗后，大鼠血压持续回升，动物肢体转温、表情自然、呼吸平稳，并且无死亡。说明心脉灵注射液具有回阳救逆、益气固脱的作用，能够升高血压、降低死亡率，对内毒素休克有显著疗效。

一氧化氮(NO)是一种具有多种生理功能的介质，能够调节微血管血流、抑制血小板聚集、防止白细胞激活和附壁^［4］。NO合成释放异常与内毒素休克有密切关系，由于NO必须在NOS催化下以L-Arg为底物合成，故本实验通过检测海马组织NOS活性来反映NO的变化情况，以探讨心脉灵注射液抗内毒素休克的机理。

实验结果显示，内毒素休克大鼠的海马组织NOS活性较正常组明显降低，并随休克的发展呈持续下降趋势。海马神经元对缺血缺氧尤为敏感^［5］，当内毒素入血激活机体某些潜在的反应系统引起微循环障碍时，脑组织灌流不足，可导致海马神经元的损伤；此外内毒素刺激机体产生细胞因子、氧自由基等，也可在一定程度上造成海马神经元的损伤。这与我们在光镜下观察到的病理组海马CA1区神经元明显损伤、脱失、神经细胞及细胞间质水肿的结果是一致的。由于海马神经元中有浓集的NOS，结合NOS活性及海马神经元形态观察结果，我们推测：NOS活性降低是由海马组织被破坏、大量NOS神经元损伤、丢失引起的。NOS活性下降使NO的产生减少，因而血管收缩，血液灌流更加不足，海马组织的损伤和脑细胞的破坏愈加严重。对海马CA1区形态结构观察结果显示：病理组6h的损伤明显重于1h。同时血液灌流障碍引起脑组织缺血缺氧，脑细胞能量代谢障碍，钠泵功能减低，毛细血管通透性增高，导致脑水肿。病理组脑系数较正常组明显升高，正反映了脑水肿的存在。提示：NOS活性下降促进了海马损伤及脑水肿，进一步导致脑功能障碍，使休克恶化。由此推测：NOS活性降低在内毒素休克的发展过程中有重要意义。

实验还观察到，治疗组海马组织NOS活性较病理组显著增高，这反映出海马组织结构得到保护、NOS神经元功能逐渐恢复，与光镜下对海马CA1区的形态学观察结果相吻合。可见心脉灵注射液有良好的保护脑组织、增强海马组织NOS活性的作用。

作者简介：陶虹，女，22岁，在校本科生

作者单位：北京中医药大学北京100029

参考文献

[1]黄启福.休克与厥脱现代研究述评.北京中医药大学学报，1994，17(5)：2～7

[2]梁虹，黄启福，邹丽琰，等.心脉灵抗内毒素休克肝脂质过氧化的实验研究.北京中医药大学学报，1995，18(1)：49～52

[3]叶林书，江朝光.一氧化氮与脓毒性休克研究进展.医学信息，1996，9(4)：27～28

[4]武忠弼主编.病理学.第4版.北京：人民卫生出版社，1996.442～443