北京中医药大学学报1999年第1期

钱会南王洪图齐治家张秋菊梁怡

摘要为了研究调理脾胃复方的抗痫作用，本实验采用放免法观察大鼠PTZ点燃以及服用调理脾胃复方治疗后，脑内阿片肽含量的变化。结果表明，PTZ点燃大鼠海马内亮脑啡肽(L-ENK)、β-内啡肽(β-EP)明显升高，强啡肽A1-13(DYNA1-13)显著降低；大脑皮层内L-ENK明显升高，DYNA1-13、β-EP无明显变化。用调理脾胃复方治疗后，上述脑区L-ENK、β-EP显著减少，DYNA1-13明显增加。提示癫痫发作及调理脾胃复方抗痫作用可能与脑内L-ENK、β-EP、DYNA1-13的变化有关。

关键词：调理脾胃复方 PTZ点燃大鼠 亮脑啡肽 β-内啡肽 强啡肽

癫痫是神经系统的常见病、多发病，然而其确切的发病机理至今尚未完全阐明，目前对该病也缺少理想的根治手段。有关研究资料表明，神经肽作为中枢神经系统中的重要递质或调质，在癫痫发病中起着重要作用，其中的阿片肽等肽类物质扮演着十分重要的角色，但尚未见到PTZ点燃大鼠模型脑内亮脑啡肽(L-ENK)、β-内啡肽(β-EP)、强啡肽A1-13(DYNA1-13)含量变化的有关报道。为探讨癫痫发病机制和中药调理脾胃复方的治疗作用，我们观察了PTZ点燃大鼠癫痫模型部分脑区L-ENK、β-EP、DYNA1-13含量的变化。

1材料与方法

1.1材料

戊四唑(PTZ)Sigma公司产品，用前以生理盐水新鲜配制成溶液。调理脾胃复方(草果、知母、厚朴、半夏、茯苓、黄芩、甘草等)，购于北京中医药大学门诊部，按乙醇提取法提取浓缩，生药含量为2g/mL，置冰箱待用。抗痫灵(Antipilepsirine,AES)，购于北京医科大学药厂，用0.5%羟丙甲基纤维素，0.1%吐温80和双蒸水配制成混悬口服液。

L-ENK、β-EP、DYNA1-13药盒均由上海第二军医大学提供。

1.2方法

1.2.1PTZ点燃模型的制备

SD雄性大鼠，实验开始时体重(150±10)g，购自首都医科大学实验动物中心。造模组用PTZ亚惊厥剂量，32mg/kg，每日1次，腹腔注射，持续28d，停药1周，再用相同剂量的PTZ测试，凡显示连续5次2级以上惊厥的大鼠为达到点燃标准。大鼠惊厥发作评分标准：0级，没有行为上的发作；Ⅰ级，节律性点头或头部颤搐；Ⅱ级，阵挛性咀嚼；Ⅲ级，头部颤搐加前肢阵挛性抽搐；Ⅳ级，袋鼠姿势(上身直立)；Ⅴ级，跌倒；Ⅵ级，强直性惊厥。正常对照组给予相同剂量的生理盐水。

正常对照组大鼠10只，胃饲双蒸水2mL/(kg．d)；PTZ点燃大鼠分为3组，其中模型对照组10只，胃饲双蒸水2mL/(kg．d)；调理脾胃治疗组(中药组)，胃饲调理脾胃复方5g/(kg．d)；AES治疗组(西药组)，胃饲抗痫灵0.5g/(kg．d)；共维持28d。

1.2.2阿片肽测定方法

实验第63天，模型组PTZ点燃测试1h后，全部动物断头活杀，迅速取出全脑，沸生理盐水煮10min，将脑正中矢状切开，分离出海马、皮层，称重后加1mL1mol/LHCl制成匀浆，室温放置100min。取上清，置-70℃冰箱保存。测定采用放免法。严格按照说明书进行操作。

2结果

2.1大鼠海马内L-ENK、β-EP、DYNA1-13测定

结果见表1。

表1大鼠海马L-ENK、β-EP、DYNA1-13含量变化(ng/g；x±s；n=10)

组别 L-ENK β-EP DYNA1-13 模型组 18.53±4.87 23.47±5.03 2.68±0.68 正常组 9.45±2.19^** 10.82±2.57^** 6.10±0.95^** 西药组 9.38±2.08^** 14.05±2.18^*△ 5.02±1.29^** 中药组 10.20±2.12^** 12.37±1.80^** 4.89±1.32^** 注：与模型组比较，*＜0.05**P＜0.01；与正常组比较△P＜0.05

2.2大鼠大脑皮层内L-ENK、β-EP、DYNA1-13测定结果见表2。

表2大鼠大脑皮层L-ENK、β-EP、DYNA1-13含量变化(ng/g;x±s；n=10)

组别 L-ENK β-EP DYNA1-13 模型组 19.11±2.84 3.13±0.35 3.44±0.66 正常组 8.46±1.90^** 2.75±0.34 3.50±0.68 西药组 9.40±1.72^** 2.94±0.29 3.59±0.74 中药组 10.09±1.94^** 3.09±0.26 3.65±0.57 注：与模型组比较**P＜0.01

3讨论

给予动物脑内注射L-ENK、β-EP可引起动物癫痫样活动，并产生持续的癫痫样放电，还可导致动物点燃发作效应^［1，2］。脑室内注射小剂量β-EP能产生“边缘性癫痫发作”，β-EP还能降低PTZ诱导惊厥发作阈值，增强PTZ导致癫痫发作的敏感性^［3］。因而有人提出ENK、β-EP与癫痫发作有密切关系，属内源性致痫物质。而DYN则与上述二者的作用不同。DYN注入动物脑内可提高PTZ及六氟双乙基乙醚等致惊剂的惊厥阈值，对癫痫点燃性发作产生强烈的抑制作用，并升高海马的后放电阈值，认为DYN可能调节点燃发作的敏感性，为内源性抗痫物质^［4，5］。王氏等报道杏仁核点燃、青霉素致痫等癫痫模型海马内ENK含量显著升高，而DYN则明显下降^［6，7］。沈氏等亦观察到，声源性惊厥易感大鼠海马、大脑皮层内ENK、β-EP含量明显增加^［8］。本实验结果与上述报道基本相符。

目前中医对癫痫的治疗多侧重于熄风定痫、豁痰开窃、镇惊安神、育阴潜阳、活血化瘀等方面^［9］，较少重视脾胃的作用。王洪图教授根据《内经》强调脾胃为五脏枢轴的理论，结合多年临床经验，从调理脾胃入手，以草果知母汤为基础方化裁组成调理脾胃方，治疗癫痫等神志异常疾患，取得了较好疗效。通过调理脾胃，使气机调畅，不仅有利于化除痰浊，使之不再扰乱神志，又可使精微物质化生正常，营血充足，而保持神志活动正常；更为重要的是，由于脾胃气机调畅，通过其“转枢”作用，使其他脏腑气机都能得到调整，从而达到治疗癫痫等多种神志异常疾患的目的。本室以往的研究表明^{［10，11］}，该复方能有效对抗听源性癫痫发作，PTZ阈值大发作及点燃和极量电休克惊厥发作，未见明显毒副反应。并对生长抑素mRNA的表达有影响。本实验观察到PTZ点燃大鼠海马内L-ENK、β-EP含量明显增加，DYNA1-13含量显著减少；大脑皮层内L-ENK含量亦明显升高，调理脾胃复方治疗后，上述变化被拮抗或翻转。我们认为，癫痫发作及调理脾胃复方抗痫机制可能与脑内L-ENK、β-EP、DYNA1-13的变化有关。

作者简介：钱会南，女，42岁，医学博士

作者单位：北京中医药大学北京100029

参考文献

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[4]Przewlok R.Shearman GT and Herz A. Mixed opioid/nor-opiod effects of dynorph in and dynorphin related peptides affer their intrathecal injection in rats.Neur opeptides,1983,3：233～239

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[8]沈上，田津斌，韩济生.P77 PMC大鼠和Wistar大鼠中枢某些神经肽含量比较.北京医科大学学报，1996，28(1)：16

[9]钱会南.