乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒反式调节靶基因的抑制性消减
2022-07-29
来源：求医网
国内（北京）一项研究通过筛选与克隆HBV和HCV蛋白反式调节靶基因，阐明HBV和HCV感染后慢性肝脏疾病的发病机制． 应用抑制性消减杂交(SSH)技术及表达谱基因芯片(cDNA microarray)技术筛选并克隆HBV和HCV蛋白反式调节的靶基因．以HBV和HCV蛋白的表达质粒转染HepG2细胞，以空载体pcDNA3．1(-)为平行对照，制备转染后的细胞裂解液，提取mRNA并逆转录为cDNA，经RsaI酶切后，将实验组cDNA分成两组，分别与两种不同的接头衔接，再与对照组cDNA进行2次消减杂交及2次抑制性聚合酶链反应(PCR)，将产物与T／A载体连接，构建cDNA消减文库，并转染大肠杆菌进行文库扩增，随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析．同时进行表达谱基因芯片技术分析． 结果显示，成功构建了人HBV和HCV蛋白反式调节基因差异表达的cDNA消减文库，对HBV和HCV蛋白反式调节的靶基因同时进行基因表达谱芯片的分析．在SSH分析中，文库扩增后均得到200—800bp插入片段． 对插入片段测序，并通过生物信息学分析获得其全长基因序列．对于不同的肝炎病毒蛋白反式调节的靶基因类型，以及不同的分析技术研究的结果进行比较分析，发现了一系列的共同调节的靶基因，说明不同的肝炎病毒蛋白反式调节具有共同的作用途径． 该研究表明，筛选到的反式调节靶基因，包括一些与细胞生长调节、信号转导、肿瘤免疫发生及细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因，推测了HBV和HCV蛋白可能存在的调控机制，有助于阐明HBV和HCV蛋白的反式调节在慢性肝脏疾病的发生发展中的作用．
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