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转基因技术体外培养bFGF的RPE细胞

2022-07-30
来源:求医网

转基因技术体外培养bFGF的RPE细胞

原发性视网膜色素变性主要病理改变在视网膜的外层,尤其是杆体细胞的进行性退行性病变及视网膜由外向内各层组织不同程度的萎缩,表现为RPE细胞的变性和增生,但有些视网膜色素上皮RPE细胞的色素可完全脱失,并移行至视网膜内。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)已被公认为光感受器存活因子,能延迟感光细胞的变性,从而达到治疗视网膜色素变性的目的。吉林大学第二医院眼科等单位的研究人员应用转基因技术,以绿色荧光蛋白(GFP)作为标记基因,体外培养稳定表达人bFGF的视网膜色素上皮(RPE)细胞,探讨转基因技术体外培养稳定表达人碱性成纤维细胞生长因子的视网膜色素上皮细胞的可行性。

方法:构建以绿色荧光蛋白(GFP)为标记基因的人bFGF真核表达载体pcFG。应用脂质体介导法转染人RPE细胞,以G418筛选出表达bFGF的RPE细胞,并进行细胞克隆,传代培养4周。于荧光显微镜下观察GFP的表达情况,用原位杂交和免疫组织化学染色法检测bFGF在RPE细胞的表达情况。结果:酶切结果证实含有GFP的真核表达载体pcFG构建正确。在荧光显微镜下可见RPE细胞表达绿色荧光蛋白。经原位杂交和免疫组织化学染色证实,转染pcFG后的RPE细胞内有大量bFGF-mRNA的转录蛋白表达。

结论:应用转基因技术可体外培养稳定表达bFGF的RPE细胞,为进一步行视网膜下腔细胞移植术、延迟或逆转感光细胞变性、治疗视网膜色素变性奠定了基础。

2003.05.29

中华眼科杂志