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人亲环素基因克隆表达获成功
南京军区南京总医院全军医院检验中心李芳秋副教授等经过3年的研究，采用基因工程方法成功地对人亲环素基因进行了克隆和体外高效表达，并利用重组人亲环素进行了一系列临床应用研究。这一成果不久前荣获江苏省科技进步二等奖。
亲环素又称环孢素A结合蛋白（cyclophilin），具有多种生物学活性，参与信号传导，调节细胞凋亡，催化蛋白质折叠，是环孢素A的细胞内受体，介导环孢素A发挥免疫抑制作用。它在细胞和体液中的含量直接影响环孢素A的药效发挥。研究发现，全身性红斑狼疮（SLE）患者体内能够产生抗亲环素自身抗体，而且与疾病的活动性有关，艾滋病病毒1型（HIV－1）的有效复制也需要亲环素的参与。因此，重组人亲环素的研制成功对某些临床疾病的研究有重要意义。
李芳秋等设计合成了一对含2个酶切位点的寡核苷酸引物，用逆转录PCR（RT－PCR）技术从人MT4细胞总RNA中获取编码亲环素的cDNA，通过基因重组将亲环素基因连接到pET11c载体中。然后将重组质粒导入大肠杆菌，诱导目标蛋白高效表达。重组人亲环素的产量达细菌可溶性总蛋白量的41％，经测试具有和天然亲环素完全相同的生物学活性。
研究小组利用纯化的重组人亲环素制备出高效价的单克隆和多克隆抗体并建立了敏感、可靠的研究亲环素在体内分布和体液中含量的检测技术。首次发现全身性红斑狼疮患者血浆和淋巴细胞内亲环素水平均显著高于健康人，而且活动期红斑狼疮病人水平又显著高于非活动期病人。根据环孢素A可与亲环素结合的特性，李芳秋等以重组人亲环素为结合蛋白，建立了测定环孢素A血药浓度的放射免疫测定法，经200余例患者的测定与国外试剂测定结果呈高度相关（r=0.96,P＜0.001）。这种方法不仅能测定环孢素A本身，还能测定有药学活性的环孢素A的代谢产物，对研究环孢素A的药动学和药效学及改善环孢素A临床治疗都具有良好的前景。
2001.02.09
