自60年代初期人们就进行黑素细胞体外培养。希望能将培养的黑素细胞移植到白癜风皮损处,用以治疗白癜风。然而由于缺乏一个以正常黑素细胞为主要成分的组织来源(表皮中角朊细胞与黑素细胞之比35:1),且黑素细胞在体外分裂和生长缓慢,易被生长繁殖快的角朊细胞(KC)、成纤细胞覆盖。1987年美国耶鲁大学皮肤科Lerneres采用体外培养黑素细胞进行自体移植,成功地治疗了1例斑驳病与2例白癜风。此后又有不少运用本法治疗白癜风的成功报道。移植成活的黑素细胞经多巴染色、电镜观察及免疫荧光染色证实,其分布与生理状况下的分布是一致的。
从正常人的皮肤标本中选择性地培养出纯的黑素细胞,对于研究黑素细胞的细胞生理、病理,皮肤色素代谢,各种物质对黑素细胞增殖和色素代谢的影响,皮肤老化以及色素性疾病如白癜风的病因、病理、治疗提供了有利的条件和途径。
培养注意事项
(1)适宜的细胞接种浓度:原代培养时接种用表皮细胞悬液的细胞数不能过低,否则黑素细胞含量不足,难以大量生长,但过高则易致角朊细胞生长,使培养失败。一般选用5×105/ml效果为好。
(2)防止成纤维细胞污染的关键是严格掌握表皮真皮分离程序,即修剪彻底,消化充分,分离仔细。万一发生则应早期加入100μg/ml的基因素共同培养。一般加12次即可抑制。
(3)由于TPA、IBMX等重要添加剂含量极微,易在配制过程中丢失,值得注意。
(4)培养液酸碱度:MC在PH值为7.2时最适合,低于6.8或高于7.6则产生不良影响,所以应当严格控制,且尽可能做到新鲜配制。
(5)细胞没有生长到足以覆盖瓶底的大部分表面之前,不要急于传代,传代要选择在对称生长期,首次传代接种细胞浓度以5×104/ml为宜。
黑素细胞体外培养自体移植治疗白癜风的疗效肯定,但设备要求高,难以推广,且工作量大,成本高。培养又可分为带表皮黑素细胞培养和黑素细胞纯培养。从实验结果看,原代培养细胞的量和疗效二者之间无明显差异。但前者的优点是成本低,添加成分少,缺点是黑素细胞不能传代增殖。纯培养要求添加选择性促黑素细胞增殖的试剂,如TPA是一个细胞诱变剂,是黑素细胞培养中最重要的选择性促进其增殖的因素之一。在它选择性刺激下增殖的黑素细胞是否有突变,是人们关心的问题。Bennett等观察了在TPA支持下培养的黑素细胞,传15代后并未发现有突变现象,故在此条件下原代培养的黑素细胞用于临床治疗白癜风被视为是安全的。但传代培养应慎重。近年来国外同类治疗采用添加BFGF和双丁环磷酸腺苷取代TPA来促进黑素细胞增殖。这样通过传代培养来获得大量的黑素细胞,为临床治疗大面积稳定期白癜风提供了一个有希望的方法。除了是否会千万细胞畸变外,黑素细胞经培养对自身有无不良影响?远期效果如何?会否被重新破坏?这些问题均无定论,有待于进一步研究证实。
虽然体外培养黑素细胞治疗白癜风仍处于试验阶段,但随着黑素细胞培养方法的不断改进,其疗效必然会进一步提高,可望成为临床上一种行之有效的常规方法。
