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霍乱弧菌2种核糖体分型方法比较

2022-07-28
来源:求医网

【关键词】 分型方法

目前分子杂交技术已广泛用于霍乱弧菌检测中,是霍乱疫情中追踪传染源的主要检测方法之一〔1〕。本文以16S-23S-5S rRNA为探针,对霍乱疫情中分离的霍乱弧菌进行Southern杂交后,使用2种限制性内切酶普通变形杆菌Ⅱ型酶(PVU Ⅱ)和大肠埃希菌R I型酶(ECORⅠ),对2种核糖体分型(RT)方法的图谱进行分析比较。现将结果报告如下。

材料与方法

(1)菌株来源:暴发疫情分离株27株,先后分离自本市2004年2起霍乱疫情,其中11株来自食用某快餐公司盒饭引起腹泻的11例患者粪便标本,4株为该快餐公司的盒饭加工环境涂抹标本;7株分离自某养殖场消毒前养殖水标本,5株为该养殖场消毒后养殖水标本。散发病例分离株3株,1999年2株,2001年1株。(2)试剂与仪器:培养基、霍乱诊断血清和噬菌体生物分型试剂(中国疾病预防控制中心);限制性内切酶PVU II、ECORⅠ,16S-23S-5S rRNA基因探针和染色体DNA提取试剂盒(美国杜邦公司);Riboprinter Microbial Characterization System(美国杜邦公司)。(3)菌株常规鉴定:参考文献〔2〕。(4)分型方法比较:2种RT方法按美国杜邦公司提供的仪器和试剂盒说明书进行。染色体DNA分别经ECORⅠ、PVU II酶切,16S-23S-5S rRNA基因探针杂交后,根据杂交条带的数目和片段大小的差异,判断RT结果。

结果

(1)血清学和噬菌体生物分型:30株分离株均为01群霍乱弧菌,其中分离自腹泻患者及盒饭加工环境的15株霍乱弧菌,血清学分型均为01小川型,噬菌体生物分型为221和91;分离自消毒前养殖水标本的7株,血清学分型均为01稻叶型,噬菌体生物分型5f、1e和1f,分离自消毒后养殖水标本的5株,血清学分型均为01小川型,噬菌体生物分型1e和1f;散发株中,1株为01小川1b(1999),1株为01稻叶1d(2001),1株为01稻叶8k(1999)。(2)2种核糖体分型:①ECORⅠ分型:30株01群霍乱弧菌经ECORⅠ分型,得到2个型,分别为RT5,29株(条带拷贝分别为10