【摘要】 目的 研究大肠癌组织转化生长因子β1（TGF|β1）表达和意义及在血管生成中的作用。方法 运用免疫组化S|P法检测70例大肠癌、10例正常大肠粘膜组织标本TGF|β1、血管内皮生长因子（VEGF）表达及微血管密度（MVD）。结果 大肠癌TGF|β1表达较正常大肠粘膜明显增强；TGF|β1过度表达与淋巴结转移、Dukes分期及预后密切相关；TGF|β1表达与VEGF表达密切相关，与MVD无直接关系。结论 TGF|β1促进大肠癌细胞浸润转移；TGF|β1过度表达可作为判断大肠癌预后具有参考意义新指标；TGF|β1通过上调大肠癌VEGF表达间接促进肿瘤血管生成。

【关键词】 大肠癌;转化生长因子β1;血管生成

The expression of transforming growth factor|β1 and the correlation with the angiogenesis in colorectal carcinoma

TANG Hua,ZHANG Cai|quan,XIANG ZHeng

Department of General Surgery,The Clinical College of

Chongqing Medical University,Chongqing 400016,China

Abstract:Objective To investigate the expression of transforming growth factor|β1(TFG|β1) and its significance as well as its effect on the angiogenesis in colorectal carcinoma (CRC).Methods The expression of TGF|β1,the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and microvessel density (MVD) in 70 patients with CRC and 10 normal colorectal mucosal tissues were examined by immunohistochemistry.Results Compared with the normal colorectal mucosal tissues,the expression of TGF|β1 in CRC is higher.The overexpression of TGF|β1 is associated with lymphatic metastasis,Dukes staging and poor prognosis.The expression of TGF|β1 is closely associated with VEGF expression other than MVD.Conclusion TGF|β1 stimulates CRC cells infiltration and metastasis.The overexpression of TGF|β1 is a new maker can predict prognosis in patients with CRC.TGF|β1 promotes angiogenesis indirectly through an up|regulation of VEGF expression in CRC.

Key words:Colorectal neoplasms;Transforming growth factor β1;Angiogenesis

肿瘤生长依赖于血管生成。转化生长因子|β1（TGF|β1）是一种血管生成因子。本实验采用免疫组化S|P法检测70例大肠癌组织TGF|β1、血管内皮生长因子（VEGF）表达和肿瘤微血管密度（MVD），并分析TGF|β1表达与临床病理因素、预后、VEGF表达及MVD间关系，旨在探讨TGF|β1表达在大肠癌的意义和在血管生成中的作用。

1 材料和方法

1.1 材料

1993～1995年术前未经抗肿瘤治疗大肠癌切除标本70例。据全国大肠癌病理研究统一规范[1]，按组织学类型分腺癌、粘液腺癌、印戒细胞癌；按组织学分化程度分高、中、低分化癌；按Dukes分期分A、B、C期。本组男39例、女31例，年龄27～74岁，中位年龄51岁；64例获得随访，随访率91.4%。另取10例病理证实正常大肠粘膜作对照，见表2。

1.2 方法和试剂

免疫组化染色用S|P法。SP试剂盒、即用型抗TGF|β1多抗及抗CD34单抗购自福州迈新公司；浓缩型抗VEGF单抗购自北京中山公司，工作滴度1：50。PBS液代替一抗作阴性对照，已知阳性切片作阳性对照。染色结果判断：按10%以上细胞浆或胞膜棕黄染色为TGF|β1表达阳性[2]；按10%以上细胞浆或胞膜棕黄染色为VEGF表达阳性[3]；MVD按 Weider[4]标准，肿瘤区凡棕色单个内皮细胞或内皮细胞簇均作为一个血管计数，肌层较厚及管腔面积大于8个红细胞直径血管不计数；每张染色切片在低倍镜下选择3个血管最多的癌间质区，在200倍视野下行血管计数，每例标本分别计数5个视野，取其平均值。

1.3 统计学处理

各因素间关系判断用χ2和u检验。生存率分析用Kaplan|Meier乘积限法及Log|rank时序检验分析组间生存率差异。P＜0.05为有显著性差异。

2 结果

2.1 大肠癌TGF|β1表达及与临床病理因素关系

TGF|β1阳性表达于癌细胞浆或胞膜。70例肿瘤中37例（52.9%）TGF|β1表达阳性，较正常对照组表达显著增强。PBS阴性对照组未染色。TGF|β1阳性表达率与组织学类型和分化程度无关；与有无淋巴结转移及临床病理分期（Dukes分期）显著相关,见表1、表2。表1TGF|β1在不同大肠组织中的表达表2大肠癌TGF|β1表达与临床病理因素的关系注:与阴性组比较,*P<0.05;A期、B期与C期比较，**P<0.05

2.2 大肠癌TGF|β1表达、 VEGF表达、MVD间关系

VEGF阳性表达于癌细胞浆或胞膜，强阳性染色癌细胞多见于肿瘤浸润前缘。本组VEGF阳性表达47例（67.1%），正常大肠粘膜未见表达。

CD34标记肿瘤间质微血管，微血管大小、形态差异大，微血管丰富区多见于肿瘤浸润前缘。全组MVD范围21～134不等，±s为73.2±20.6。

全组37例TGF|β1阳性肿瘤中34例VEGF阳性，33例TGF|β1阴性肿瘤中20例VEGF阴性，示TGF|β1表达与VEGF表达密切相关；TGF|β1阳性肿瘤组MVD值79.4±23.3，较阴性组71.3±19.8有增高趋势，但两者间无显著差异。VEGF阳性肿瘤组MVD值91.3±23.5，阴性组62.7±14.9，两者差异显著。TGF|β1/VEGF双阳性肿瘤组MVD值92.5±22.8，较TGF|β1阳性/VEGF阴性和TGF|β1阴性/VEGF阳性组80.8±24.3及TGF|β1/VEGF双阴性组63.4±14.6增高，且与双阴性组比较差异显著，见表3、4。表3 大肠癌TGF|β1表达与VEGF表达、MVD计数的关系表4 大肠癌TGF|β1表达、VEGF表达与MVD计数的关系注：阳性/阳性与阴性/阴性比较，*P<0.05

2.3 大肠癌TGF|β1表达与预后

Kaplan|Meier法分组计算5年生存率示TGF|β1表达阳性肿瘤组32.7%，阴性组66.2%；Log|rank检验示两组间5年生存率差异显著（χ2=4.58，P<0.05）。

3 讨论

TGF|β1是重要的上皮细胞生长负性调节因子，可诱导细胞凋亡；其以自分泌和旁分泌两种方式与靶细胞表面相应受体（TGF|βRⅠ、Ⅱ）结合发挥生长抑制功能。文献报告TGF|β1参与多种病理生理过程，并在肿瘤发生及发展中有重要作用。本实验发现大肠癌组织TGF|β1过度表达，且阳性表达于胞浆或胞膜，因而从形态学和蛋白水平表明大肠癌细胞具有自分泌TGF|β1功能；同时TGF|β1表达与淋巴结转移、临床病理分期（Dukes分期）及术后生存率相关，提示大肠癌细胞自分泌TGF|β1对肿瘤生物学行为产生广泛影响，TGF|β1促进大肠癌细胞浸润转移并影响预后，故检测TGF|β1表达可作为判断大肠癌预后具有参考意义的新指标。目前认为TGF|β1促进大肠癌发生和进展的主要机制可能是大肠癌细胞表面TGF|β1受体表达缺失或大肠癌细胞通过下调TGF|β1受体表达而逃逸TGF|β1介导的生长抑制作用[5,6]。

TGF|β1作为血管生成因子已被认识，但在大肠癌组织血管生成中的作用不清楚。本实验发现大肠癌组织TGF|β1表达与 VEGF表达紧密相关，而VEGF表达与MVD值显著相关，并且TGF|β1/VEGF双阳性肿瘤组MVD值最高，故表明大肠癌细胞自分泌TGF|β1可能通过上调VEGF表达调控肿瘤血管生成。尽管本实验发现TGF|β1阳性肿瘤组MVD值较阴性组有增高趋势，但两者间并无统计学差异。目前认为低氧是诱导VEGF表达最重要因素，低氧通过激活VEGF mRNA转录并增加其稳定性而上调体外培养细胞VEGF表达[7,8]；还有报告突变型P53、ras基因、PDGF等也可增强VEGF表达促进肿瘤血管生成[9|11]。由此可见VEGF表达上调是由多种因子共同介导而非单独由TGF|β1简单调控所致，因此本实验未识别出TGF|β1表达与MVD间的直接关系。TGF|β1通过上调VEGF表达间接促进肿瘤血管生成可能也是TGF|β1促进大肠癌细胞增殖、浸润和转移的机制之一。

【参考文献】
[1] 全国大肠癌病理协作组.全国大肠癌病理研究统一规范[J].中华肿瘤杂志,1986,8(2):156|158.

[2] 熊斌,袁宏银,冯茂辉,等.大肠癌中TGF|β1、TGFβRⅡ蛋白的免疫组化检测[J].癌症,2000,19(9):945.

[3] Saito H,Tsujitani S,Ikeguchi M,et al.Relationship between the expression of vascular endothelial growth factor and the density of dendritic cells in gastric adenocarcinoma tissue[J]. Br J Cancer,1998,78(12):1573|1577.

[4] Weider N.Current pathologic methods for measuring intratumoral microvessel density with breast carcinoma and other solid tumors[J]. Breast Cancer Res Treat, 1995,36(2):16