【摘要】 目的 探讨大肠癌中唾液酸化的路易斯寡糖X（Sialyl LewisX，SLeX）抗原和CD44v6基因蛋白表达及临床意义。方法 采用高敏感性的催化信号放大免疫组化技术，检测78例大肠癌、20例癌旁组织和20例正常组织中SLeX抗原和CD44v6基因蛋白表达。结果 大肠癌中SLeX抗原和CD44v6基因蛋白阳性表达率分别为82.1%和83.3%，癌旁组织中为35%和40%，正常组织中为阴性，三者之间差异具有显著性(P＜0.01)；SLeX抗原和CD44v6基因蛋白表达具有一致性，且与大肠癌的临床分期、分化程度、淋巴结及远处转移和预后有关(P＜0.05)。结论 SLeX抗原和CD44v6基因蛋白表达在大肠癌发生、发展中发挥重要作用，检测大肠癌中SLeX抗原和CD44v6基因蛋白表达可作为判定其预后的新的生物学指标。

【关键词】 大肠癌；细胞黏附分子；预后

研究发现，细胞黏附分子（cell adhesion molecular，CAM）在肿瘤细胞异质黏附性增强中发挥关键作用，其介导的细胞与细胞之间和细胞与细胞外基质（ECM）之间的相互作用是恶性肿瘤侵袭转移的生物学基础。唾液酸化的路易斯寡糖X抗原（Sialyl LewisX，SLeX）和CD44v6同属于CAM家族，其表达与乳腺癌、肺癌等多种肿瘤的侵袭转移有关〔1～6〕，肿瘤细胞通过表达SLeX与内皮细胞相互作用，促进其生长，而CD44v6表达参与了肿瘤细胞与宿主细胞及基质的黏着，促进了瘤细胞侵袭转移。本研究进一步探讨SLeX和CD44v6在大肠癌中的表达及其与大肠癌临床病理因素的关系。

1 资料与方法

11 一般资料 78例大肠癌组织、20例癌旁组织(距癌灶＜2 cm)为1991年4月～1998年5月间大肠癌根治术手术切除标本。大肠癌患者男47例，女31例，年龄31～78岁(中位年龄56岁)。肿瘤长径3.2～12.3 cm(平均5.5 cm），伴坏死36例；伴淋巴结转移58例，肝肺等远隔转移20例。Dukes分期：A期11例，B期16例，C期28例，D期23例。分化程度：高分化腺癌12例，中分化腺癌34例，低分化腺癌32例。随访6～72个月，5年生存者37例。全部标本均为10%甲醛固定，常规脱水、透明、浸蜡和石蜡包埋，4 μm连续切片，分别作HE染色和免疫组织化学染色。

12 试剂与方法 兔抗人SLeX和CD44v6 mAb，生物素化抗鼠IgG、生物素化酪胺（BT）和催化信号放大（CSA）试剂盒均为丹麦Dako公司产品。免疫组化染色：采用CSA法，操作按CSA试剂盒说明进行，DAB+H2O2显色。用已知SLeX和CD44v6 阳性胃癌组织作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。

13 结果判定 阳性信号为棕黄色。根据阳性细胞染色范围及强度分为3级：Ⅰ级为阴性（-）：无明显阳性反应细胞；Ⅱ级为弱阳性（+）：阳性细胞＜50%、染色较弱；Ⅲ级为强阳性（）：阳性细胞≥50%、染色较强。

14 统计学处理 采用SPSS10.0统计软件进行χ2检验。

2 结果

21 SLeX和CD44v6在大肠癌、癌旁组织和正常组织中的表达 SLeX和CD44v6 阳性产物均定位于细胞质和细胞膜内，呈棕黄色、棕褐色颗粒或团块状。大肠癌中SLeX和CD44v6表达分布不均，以瘤细胞增殖活跃部位的细胞质最强，阳性率分别为82.1%（64/78）和83.3%（65/78）。癌旁组织中SLeX和CD44v6表达多位于细胞膜，呈弱阳性，阳性率分别为35%和40%，与它们在大肠癌中的表达比较，差异有显著性（χ2=17.66，χ2=15.73，P＜0.01）。20例正常组织中SLeX和CD44v6均为阴性。

22 SLeX和CD44v6表达与大肠癌临床病理指标的关系 SLeX和CD44v6阳性表达与大肠癌的分化程度、临床分期及发生淋巴结和远处器官转移有关，与肿瘤大小、坏死及患者性别和年龄无关（表1）。

表1 SLeX和CD44v6表达与大肠癌临床病理指标的关系（略）

23 SLeX和CD44v6表达与大肠癌患者预后的关系 78例大肠癌患者于5年内复发转移者53例，因大肠癌死亡41例。癌组织中SLeX和CD44v6阳性表达的患者，在5年内复发、转移者居多，生存期大于5年者少（表2）。

表2 SLeX和CD44v6表达与大肠癌预后的关系（略）

24 大肠癌组织中SLeX和CD44v6表达的关系 在64例SLeX阳性表达的大肠癌组织中，CD44v6阳性表达率为89.1%，在SLeX阴性表达的14例大肠癌组织中，CD44v6阳性表达率为57.1%，SLeX阳性表达者与SLeX阴性表达者的CD44v6阳性表达率比较差异有显著意义（χ2=8.43，P＜0.01）。在SLeX和CD44v6均阳性表达的57例大肠癌患者中，发生淋巴结转移52例（91.2%），患者生存期≥5年者21例（36.8%），而在SLeX和CD44v6均阴性表达的6例患者中未发生淋巴结转移，而生存期≥5年者6例（100%），差异均有显著性（χ2=25.34，P＜0.01；χ2=6.45，P＜0.05）。

3 讨论

31 SLeX表达与大肠癌的关系 SLeX是Lewisx抗原半乳糖的外侧α2,3键连接唾液酸（sialyl）形成，为细胞黏附分子P选择素所识别的一个配基，由半乳糖(Gal)、葡萄糖(Glc)、唾液酸(NeuAc)、N乙酰基(Nac)、岩藻糖(Fuc)5个分子结合而成。有研究表明，SLeX作为糖链末端结构之一，与肿瘤的发生发展密切相关，是多种肿瘤的预后指标，其在血液中含量可作为鉴别良恶性肿瘤的重要依据〔1～3〕。本研究结果显示，大肠癌组织SLeX阳性表达率明显高于其在癌旁组织的阳性表达率，且临床分期越晚、分化程度越低者癌组织中SLeX常呈阳性或强阳性表达。同时，SLeX阳性表达的癌组织更易发生淋巴结和远处器官转移，并缩短了患者的生存期。这可能是因肿瘤细胞通过表达SLeX与内皮细胞相互作用，促进肿瘤细胞生长〔4，5〕，即瘤细胞借助细胞表面SLeX与激活的血管内皮细胞的E选择素、P选择素相互作用，使其沿血管内壁缓慢滚动，继而迁出血管，促成肿瘤侵袭和转移。

32 CD44v6表达与大肠癌的关系 CD44属黏附分子家族，参与细胞细胞、细胞基质间的特异性黏连，与细胞外可溶组分或细胞外基质相互作用，导致信号向细胞内传递和触发细胞应答。CD44v6是CD44的10个亚型之一，主要参与瘤细胞与宿主细胞和宿主基质的黏附，在瘤细胞的侵袭、转移中起十分重要作用〔6〕。进一步研究发现，CD44与配体或相应抗体作用后，其胞内段可直接或间接与锚蛋白结合，引起细胞内的一系列变化〔7，8〕，在信号转导中发挥重要作用。CD44还可通过介导MMP7与其底物的集聚充当反应平台角色〔9〕，同时可对细胞附近的基质发挥摄取、集聚及分解作用，调控细胞的迁移、黏附和血管生成等〔10〕。本研究结果显示，CD44v6在大肠癌组织中多呈阳性表达，显著高于其在癌旁组织的表达，且其阳性表达的癌组织多分化差，转移率高，患者生存期短，这与文献〔6〕的研究结果相一致，提示CD44v6作为重要的细胞黏附分子确实参与了大肠癌瘤细胞的分化、增殖和迁徙、侵袭。

33 大肠癌中SLeX和CD44v6表达的关系 SLeX和CD44v6同属细胞黏附分子，可通过相同或不同途径将信息传递到细胞质或细胞核，对细胞分化、增殖及迁徙发挥调控作用。本研究结果显示，SLeX和CD44v6均在晚期大肠癌中表达显著高于早、中期大肠癌，在低分化大肠癌组织中表达显著高于高、中度分化的大肠癌。SLeX阳性表达的大肠癌组织中，CD44v6阳性表达率也高，并且SLeX和CD44v6均阳性表达的大肠癌更易发生淋巴结转移，并明显缩短了患者的生存期。提示SLeX和CD44v6阳性表达在大肠癌的分化、侵袭生长和转移过程中发挥某种协同作用，检测二者在大肠癌中的表达对探索大肠癌发生发展机制十分重要。

【参考文献】
1 Nakagoe T，Fukushima K，Itoyanagi N,et al.Expression of ABH/Lewisrelated antigens as prognostic factors in patients with breast cancer〔J〕.J Cancer Res Clin Oncol，2002；128(5):25764.

2 Baldus SE，Monig SP，Hanisch FG,et al.Comparative evaluation of the prognostic value of MUC1，MUC2，sialylLewis(a) and sialylLewis(x) antigens in colrectal adenocarcinoma〔J〕.Histopathology，2002；40(5):4409.

3 Satoh H，Ishikawa H，Yamashita YT,et al.Serum sialyl Lewis Xi antigen in lung adenocarcinoma and idiopathic pulmonary fibrosis〔J〕.Thorax，2002；57(3):2636.

4 Tei K，Kawakami Kimura N，Taguchi O,et al.Roles of cell adhesion molecules in tumor antigiogenesis induced by cotransplantation of cancer endothelial cells to nude rats〔J〕.Cancer Res，2002；62(21):628996.

5 Fuster MM，Brown JR，Wang L,et al.A disaccharide precursor of sialyl Lewis X inhibits metastatic potential of tumor cella〔J〕.Cancer Res，2003；63(11):277581.

6 Zhang JC，Wang ZR，Cheng YJ,et al.Expression of proliferating cell nuclear antigen and CD44 variant exon 6 in primary tumors and corresponding lymph node metastases of colorectal carcinoma with Dukes′ stage C or D〔J〕.World J Gastroenterol，2003；9(7):14826.

7 Nagano O，Murakami D，Hartmann D,et al.Cellmatrix interaction via CD44 is independently regulated by different metalloproteinases activated in response to extracellular C2+a influx and PKC activation〔J〕.J Cell Biol，2004；165(6):893902.

8 Singleton PA，Bourguignon LY，CD44 interaction with ankyrin and IP3 receptor in lipid rafts promotes hyaluronanmediated Ca2+ signaling leading to nitric oxide production and endothelial cell adhesion and proliferation〔J〕.Exp Cell Res，2004；295(1):10218.

9 Ponta H，Sherma