【摘要】 目的 研究大肠癌患者血清中转化生长因子β１(TGFβ１)表达意义及其与癌胚抗原(CEA)、肿瘤分期的关系。方法 以酶联免疫法检测血清中TGFβ１的含量。结果 患者组血清TGFβ１(40.36±17.60ng/ml)高于对照组(19.2±7.98ng/ml)(Ｐ＜0.01),TGFβ１的含量随着肿瘤分期增加而升高(Ｐ＜0.05)且与血清中CEA含量有关(r=0.392,Ｐ＜0.01)。结论 大肠癌患者血清TGFβ１含量与肿瘤的发生、发展有关。

【关键词】 大肠癌;转化生长因子β１;酶联免疫粘附试验;血清

The significance of serum TGFβ１ expression in colorectal carcinoma patients

YUAN Ting,YUAN Hong|yin, YANG Guo|liang, et al

Department of oncology, Zhongnan Hospital of Wuhan University, Wuhan 430071,China

Abstract： Objective To investigate the levels of the transforming growth factor|β１(TGFβ１) in serum and the relationship with CEA and tumor stage in order to detect the role of TGFβ１ in patients with colorectal carcinoma. Methods Serum levels of TGFβ１ were measured using an enzyme|linked immunoabsorbent assay in 50 consecutive patients with the colorectal and compared with the ones in 30 healthy volunteers.Results Serum levels of TGFβ１ in patients with colorectal carcinoma(40.36+17.60ng/ml) were significantly higher than those in the health control group(19.2+7.98ng/ml)(P＜０．０１). Serum levels of TGFβ１ increased with increasing tumor stage (P＜０．０5).Serum levels of TGFβ１ were correlated significantly with depth of tumor invasion,lymph node metastasis, distant metastasis and serum levels of carcinoembryonic antigen(CEA).Serum levels of TGFβ１ tend to increase with increasing CEA(r=0.392;Ｐ＜０．０１). Conclusion Serum levels of TGFβ１ in colorectal carcinoma patients may be associated with disease progression.

Key words:Transforming growth factor (TGFβ１); Colorectal carcinoma; Enzyme|linked immunoadsorbent assay(ELISA); Serum

转化生长因子β１(Transforming growth factor|β１ TGFβ１)是细胞生长和肿瘤发展的一种有效的抑制因子，失去这种负性调节将导致肿瘤的发生、发展［１］。许多实验证明体外培养的恶性肿瘤细胞中TGFβ１表达增加，体内实验也证明肿瘤组织中TGFβ１mRNA和血清或血浆中TGFβ１的含量增加［3，13］。然而，关于大肠癌患者血清TGFβ１的表达情况及其临床意义(肿瘤的发展和生存期)的研究较少。我们通过测量正常人群与大肠癌患者血清TGFβ１的水平，研究两者之间有无差异，以及血清TGFβ１与CEA的表达、肿瘤分期有无相关性。

1 材料和方法

1.1 试剂 TGFβ１ELISA试剂盒购自美国Quantikine公司，CEA试剂盒购自海南华美生化有限公司。

1.2 仪器 酶标仪等。

1.3 实验对象 全部病例为1999～２０００年期间武汉大学中南医院肿瘤科收治并经病理证实的大肠癌患者。男性32人，女性18人。平均52.08岁。正常对照组为健康志愿者，男性17人，女性13人，平均45.26岁。

1.4 实验方法 被检者术前一周取空腹周围静脉血2ml，在4℃储存3h，离心20min(3000g),分离血清，在７０℃储存。

TGFβ１测定步骤：a.在ELISA试剂盒每孔中加入200ul标准液或活化标本，室温下孵育3h。b.彻底冲洗后，加入TGFβ１轭合剂(TGFβ１Conjugate)，室温下孵育1.5h。c.冲洗后，加入200ul底物液(Substrate Solution)孵育20min。d.最后加入50ul终止液。e.用酶标仪在490nm下测定。

TGFβ１的结果判断：绘出标准曲线，利用在同一条件下测得的患者血清OD值，即可在标准曲线上找出其TGFβ１的血清浓度。以正常对照组的均值+2倍的标准差作为正常范围的上限[2]。

血清CEA测定按试剂盒方法操作。

1.5 统计学方法 t检验，方差分析，直线相关回归分析，Ｐ＜0.05为显著性检验水准。

2 结果

大肠癌患者血清TGFβ１的含量(40.36±17.60ng/ml)比正常对照组(19.2±7.98ng/ml)显著增高(Ｐ＜0.01)。Dukes A、B、C、D期患者血清TGFβ１的含量分别为29.17±7.26ng/ml、39.45±11.93ng/ml、43.08±15.80ng/ml、57.84±16.23ng/ml。各期患者TGFβ１含量之间的差异有显著性(Ｐ＜0.05)(B期和C期之间差异无显著性)。各期患者血清TGFβ１水平均比正常对照组有显著性增高(Ｐ＜0.05)。表1 大肠癌患者血清CEA和TGFβ１的阳性率血清TGFβ１的表达在男、女之间差异无显著性(Ｐ＞0.05)。低分化的病人与高分化的病人TGFβ１表达无显著性差异(Ｐ＞0.0５)。血清TGFβ１的水平随着癌细胞侵润深度(Ｐ＝０．０１２)、淋巴结的转移(Ｐ＝０．０２3)以及远处转移的发生(Ｐ＝０．０05)而增高。血清TGFβ１与CEA的表达之间呈正相关关系(r=0.392;Ｐ＜0.01)。

TGFβ１以正常对照组的均值+2倍的标准差作为标准(35.14ng/ml)，大肠癌患者中血清TGFβ１的阳性率为60%。而血清CEA增高的有33%(CEA＞5ng/ml)。而患者血清中CEA或TGFβ１增高为66%,见表1。

TGFβ１表达与大肠癌病人临床病理指标的关系，见表2。

3 讨论

TGFβ１是具有广泛生物作用的一类蛋白，能促进血管生成，促使细胞粘附蛋白和细胞外糖蛋白基质的积聚，抑制免疫细胞、上皮细胞的生长和刺激间叶细胞的生长［３］，在多种细胞和组织内表达。TGFβ１以自分泌、旁分泌方式通过与细胞表面的TGFβ１的Ⅰ、Ⅱ型受体综合体结合来起作用［4］。

研究发现TGFβ１与肿瘤的发生有关。Kong等［5］发现在肺癌患者血浆中TGFβ１水平高于正常人，并认为血清TGFβ１的含量可作为预测肿瘤治疗后复发和进展的指标。还有人发现在肾细胞癌和前列腺癌病人的尿液中TGFβ１的水平亦可作为一种生物标记物［6，7］。但有些研究者发现，尽管肿瘤患者的血清TGFβ１的水平与瘤组织中TGFβ１的表达之间以及血清TGFβ１的水平与疾病的发展程度之间缺乏相关性［8，9］，但患者组比正常对照组的血清TGFβ１含量有显著性增高。因此，不论TGFβ１表达与疾病的发展程度是否相关，癌症患者血清TGFβ１水平都要高于正常人。我们对大肠癌患者血清TGFβ１的研究所得出的结论与之相同。

研究发现TGFβ１的过度表达，可能对肿瘤的转化、发展方面起促进作用［10，11］。Cui等发现高度恶性的肿瘤，特别是进展期的肿瘤不被TGFβ１抑制［12］。TGFβ１调控的生长抑制作用的消失，可能导致肿瘤发生［1３］。而一旦TGFβ１抑制生长作用消失，TGFβ１将通过其促进血管的形成、调节基质特性或抑制免疫反应的作用来促进肿瘤细胞的侵润和转移［14］。因此，TGFβ１在瘤组织内，特别是进展期的瘤组织内的表达被认为是高度恶性肿瘤的表现。

Tsushima［3］、shim［2］等人发现在大肠癌患者体内TGFβ１的水平升高，且随着肿瘤进展TGFβ１的表达增加。我们研究发现，大肠癌患者血清TGFβ１的含量与疾病的发展程度密切相关。大肠癌患者血清TGFβ１的含量比对照组显著性升高，且随着DUKES分期的增加，肿瘤侵润深度的加深，淋巴结的转移及远处转移的出现，血清TGFβ１含量也增加(Ｐ＜0.05)。这说明随着肿瘤的进展，瘤组织分泌的TGFβ１就越多，TGFβ１的表达与肿瘤的发生、发展机制是有关联的。

研究显示大肠癌患者CEA和TGFβ１有相关性［2，15］。我们也发现血清中CEA的水平随着TGFβ１的水平的升高而升高。TGFβ１的分泌机制可能与CEA的分泌机制相互影响，TGFβ１可以刺激人结肠癌细胞表达和分泌CEA［2］。因此，TGFβ１在监测肿瘤进展上可能会发挥与CEA相似作用。至于TGFβ１是如何调节CEA的表达，以及TGF能否作为一个独立的肿瘤指标还须进一步的研究。

许多研究报道TGFβ１的表达与肿瘤患者的生存期有关，但常常因为方法不同而有不同的结果。Robson［16］等人发现肿瘤患者TGFβ１阴性表达的3年生存率为80%，而TGFβ１阳性表达的患者的3年生存率为40%。但有研究发现，在乳腺癌［17］、肺癌［18］、胰腺癌［19］等患者中TGFβ１的阳性表达者往往有较长的生存期。我们的研究由于随访时间较短，尚不能就TGFβ１的表达对患者生存期的意义作出评价。需要进一