【摘要】 目的 探讨热休克蛋白27（Heat shock protein,HSP27）和bcl2、p53、Pgp蛋白在大肠癌组织中的表达及其意义。方法 运用免疫组织化学SP法检测HSP27和bcl2、p53、Pgp在72例大肠癌组织中的表达，并运用多因素COX比例风险模型分析患者的预后。结果 HSP27、bcl2、p53和Pgp在大肠癌组织中的阳性表达率分别为69.44% (50/72)、54.17%(39/72)、59.72%(43/72)和40.28%(29/72)。HSP27在高分化腺癌组的表达率为84.85%，显著高于低分化组的28.57%（χ2=29.614,P=0.000），bcl2、p53和Pgp在高分化腺癌组的表达率也高于低分化腺癌组，具有统计学意义（P<0.05）。HSP27与bcl2及Pgp在大肠癌中的表达具有相关性（r=0.380,P=0.001；r=0.284，P=0.016）。COX回归分析提示HSP27表达与生存期呈负相关。结论 HSP27、bcl2、p53和Pgp在大肠癌组织中呈高表达，提示与大肠癌耐药有关；联合检测对临床制定合理的化疗方案具有指导意义；HSP27可作为判断大肠癌预后的一个独立预测指标。

【关键词】 大肠癌免疫组化HSP27bcl2；p53；Pgp

Expression and Significance of HSP27 and bcl2、p53、Pgp Protein in Colorectal Carcinoma

CAI Yongqing*,GUO Jianbo,ZHANG Yuewei,ZHAO Lujia

Department of Oncology,Dalian Friendship Hospital,Dalian 116001,China(*Present:116033 Dalian Tumor Hospital)

Corresponding Author:GUO Jianbo,Email:monicapp@126.comAbstract：Objective To evaluate the expression and significance of HSP27 and bcl2、p53、Pgp protein in colorectal carcinoma.Methods The expression of HSP27 and bcl2、p53、Pgp in 72 cases of colorectal carcinoma were detected by SP immunohistochemical technique.Results The positive rate of HSP27 and bcl2、p53、Pgp protein was 69.44% (50/72),54.17% (39/72) and 59.72% (43/72),40.28%（29/72）,respectively.The positive rate of HSP27 in the well differentiated group was 84.85%（28/33）,while it was 28.57%（4/14）in the poor differentiated group,（χ2=29.614,P=0.000）.The positive rate of bcl2 、 p53 and Pgp was higher in the well differentiated group than in the poor differentiated group （P<0.05）.The expression of HSP27 was related to the expression of bcl2 and Pgp（r=0.380,P=0.001,r=0.284，P=0.016）.The correlation with prognosis was analyzed by COX proportional hazards model.It showed that HSP27 was independently associated with patient survival length.Conclusion The high expression of HSP27 and bcl2 、p53 、Pgp was correlated with the multidrug resistance (MDR) of colorectal carcinoma.The unitive examination of HSP27 and bcl2 、p53、Pgp may help make out a chemotherapy plan.Expression of HSP27 protein was a independent and accurate predictor of poor clinical outcome for individual colorectal carcinoma.

Key words：Colorectal carcinoma; Immunohistochemistry; HSP27; bcl2; p53; Pgp

大肠癌的发病率和死亡率在全世界呈逐年上升趋势，目前大肠癌的治疗依赖于手术切除结合化疗的综合治疗模式。但大部分患者就诊时已处于癌症中晚期，已失去手术机会或只能予以姑息性手术，因此，化疗成为中晚期大肠癌综合治疗的主要手段之一。但大肠癌的化疗敏感性极差，这与大肠癌细胞的多药耐药有密切关系。

体内外研究发现，肿瘤细胞多药耐药（Multidrug resistance,MDR）的机制十分复杂，目前研究认为大致分为：(1）药理耐药（Pharmacological resistance）；(2）生化耐药（Biochemical resistance）；(3）凋亡耐药（Apoptosis resistance）；(4）微环境耐药（Microenvironment resistance）。药理耐药和微环境耐药与药物及机体免疫状况密切相关，因此凋亡耐药和生化耐药成为国内外研究和探讨的热点。我们利用免疫组化法检测大肠癌组织中HSP27、bcl2、p53和Pgp的表达，探讨它们的表达与大肠癌耐药的相关性，旨在为有效治疗这一肿瘤、判断预后提供一些理论依据。

1资料与方法

1.1标本来源

选自我院1990年7月1日～1999年6月30日均经病理确诊的大肠癌组织标本72例。男38例，女34例，年龄33～81岁，平均年龄65.6岁，中位年龄（62.7±0.25）岁。肿瘤发生部位：结肠癌39例，直肠癌33例。组织学分型：高分化腺癌33例，中分化腺癌25例，低分化腺癌14例。大体分型：浅表型2例，隆起型17例，溃疡型53例。临床分期根据1967年Turnbull改良的Duke′s分期法，A期2例，B期20例，C期36例，D期14例。患者术前未经新辅助放化疗，术后化疗时间不等。随访截止于2002年12月31日，生存期的计算是从手术日期到随访日期或由于复发、转移而死亡的日期，随访率为84.72%（61/ 72），中位生存时间为15.3个月。

1.2免疫组织化学染色

所有标本经10%中性甲醛固定，常规石蜡包埋，连续切片厚4μm，1张作HE染色，1张切片作免疫组化染色，微波抗原修复。鼠抗人bcl2、p53、HSP27和Pgp单克隆抗体及SP试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司，操作步骤按照试剂盒说明进行。用已知阳性切片和TBS替代第一抗体分别作阳性和阴性对照，用Harris苏木素液复染。

1.3结果判断

阳性表达以细胞膜和（或）细胞质出现棕黄色染色或伴有胞核棕黄色颗粒为阳性细胞。有两位病理医生分别计数5个高倍视野或1 000个细胞。采用兼顾阳性染色的强度和阳性细胞数所占百分比的判断标准[1]。

1.4统计学处理

蛋白表达率采用χ2检验，蛋白表达的相关性采用Spearman 等级相关检验，多因素COX比例风险模型（Multivariatrive COX proportional hazards model） 分析各因素对生存期的影响，所有数据处理均采用 SPSS 11.5 进行运算。

2结果

2.1HSP27、bcl2、p53及Pgp在大肠癌组织中的表达

癌组织HE染色可见癌细胞排列成管状，见图1。HSP27阳性表达棕黄色颗粒位于胞核和（或）胞质内，呈灶性或弥漫性分布，见图2A。癌组织与癌旁组织的HSP27表达率分别是69.44%(50/72)和18.75%(9/48)，二者差异有统计学意义(χ2=29.614,P=0.000)，见表1。

bcl2阳性表达主要表现为胞膜染色，呈灶性分布，见图2B，在癌旁组织中阳性表达主要局限于腺窝底部，而表皮上皮细胞少有表达。bcl2在癌组织与癌旁组织的表达率分别是54.17%(39/72)和20.83%(10/48)，二者差异有统计学意义（χ2=13.245,P=0.000）。bcl2的阳性表达率与大肠癌患者的年龄、性别及分型之间无明显相关性（P＞0.05），见表1。

p53蛋白阳性表达主要见于细胞核，见图2C，同时可见大肠癌腺体的典型增生，部分细胞p53蛋白呈强阳性表达，见图3。p53表达率与大肠癌患者的年龄、性别、分型和临床分期之间均无明显相关性，见表1。

Pgp主要表达于癌细胞的细胞浆及细胞膜，其胞核被苏木素染成灰蓝色，见图2D。与其他临床病理参数也无相关性，见表1。

同时运用Spearman 等级相关分析提示：HSP27和bcl2蛋白在大肠癌组织中表达呈正相关（r=0.380,P=0.001），HSP27和Pgp在大肠癌组织中表达呈正相关（r=0.284，P=0.016）。

2.2 生存分析

单因素COX模型分析年龄、性别、淋巴结转移、组织学分型、临床分期、HSP27、bcl2、p53和Pgp对生存期的影响，表明HSP27、bcl2及临床分期影响预后，均与生存期呈负相关。考虑各因素间的交互作用，将以上9个因素建立多因素COX比例风险模型，其中临床分期（Duke’s分期）、年龄、HSP27表达是相关的预后因素，年龄大、分期晚（即浸润深度深）、HSP27过表达生存期短，见表2。

3讨论

大肠癌细胞为获得生存，要对抗化疗药物的毒性作用，自身存在着十分复杂的耐药机制。此外，大肠癌细胞在化疗药物的打击下，经化疗药物的诱导还可产生多种耐药因素。因此，临床上出现的耐药表型是多种机制共同参与的结果。而凋亡耐药和生化耐药正是肿瘤细胞获得多药耐药性的重要机制之一。

热休克蛋白27（Heat shock protein ,HSP27）是热休克基因（HSG）编码的低分子量蛋白质之一。表1HSP27、bcl2、 p53和Pgp在大肠癌组织中的表达注： *表示高分化与低分化比较，(1）HSP27表达：高分化vs 低分化：χ2=14.327,P=0.000；(2）bcl2表达：高分化vs 低分化：χ2=5.771,P=0.016；(3）p53表达：高分化vs 低分化：χ2=4.714,P=0.030；(4）Pgp表达：高分化vs 低分化：χ2=9.580,P=0.002 表272例大肠癌单因素和多因素COX模型生存分析它具有保护细胞免受各种应激因素损伤的作用。有学者先用热休克方法诱导前列腺癌细胞产生HSPs(HSP27和HSP72)，再应用放线菌素<