【摘要】 目的 定性检测大肠癌组织缝隙连接蛋白（Cx43）与E|钙粘素（E|Cad）的表达；定量测定正常上皮与大肠癌细胞间缝隙连接通讯（GJIC）。方法 鼠大肠癌与对照组织中Cx43和E|Cad的表达用免疫组化法检测；GJIC用荧光漂白恢复法检测。结果 大肠癌Cx43和E|Cad阳性率（40%，43%）明显低于对照组织（90%， 87%），33%肿瘤标本二者皆不表达，该组肿瘤的分化度也较差；大肠癌细胞HR，Lovo，HT|29间GJIC明显低于正常上皮细胞。结论 在鼠大肠上皮细胞恶变过程中伴有Cx43与E|Cad的表达抑制或缺失与大肠癌的发生发展有关。

【关键词】 大肠癌；Cx43；E|Cad；GJIC

Detect of GJIC and E|Cad on colorectal cancer

LIU Guo|long, WU Hong|ying, LUO Rong|cheng

Department of Oncology, NanFang hospital,

The first military medical university, Guangzhou 510515,China

Abstract:Objective Detect the expression of Cx43 and E|Cad on rat colorectal cancer tissues and normal control colon tissues.Quantitative determination GJIC in colorectal cancer cells and normal control cells.Methods Detect Cx43 and E|Cad on rat colorectal cancer tissues and normal colon tissues with immunohistochemistry method,test GJIC level on three colorectal cancer cells and one normal control cell by fluorescence photobleaching recovery method.Results The positive rate of Cx43 and E|Cad (40%、43%) on colorectal cancers were significantly lower than that on normal colon tissues (90%、87%) ；33% colorectal cancer tissues didn't express in both Cx43 and E|Cad,this group cancers show poor differentiation too.GJIC level in cancer cells HR,Lovo and HT|29 was lower than that in normal epidermal cells.Conclusion Our results suggest repress or deletion of E|Cad, Cx43 and E|Cad was relate the induce and advance of colorectal cancer.

Key words:Colorectal cancer; Cx43;E|Cad;GJIC

本文用免疫组化ABC法检测Wista大白鼠正常大肠与DMH诱发的大肠癌组织中Cx43和E|Cad的表达，荧光漂白恢复法定量检测体外培养的正常上皮与大肠癌细胞间GJIC水平。以探讨GJIC、Cx43和E|Cad与大肠癌发生发展的可能关系。

1 材料与方法

检测标本与细胞株由第一军医大学消化所提供，Cx43抗体由法国肿瘤中心YAMASAKI H教授赠送，E|Cad抗体由苏州大学分子所购买，ABC试剂盒和荧光染料CDFA从SIGMA Co.购买。

免疫组化按ABC法进行，DAB染色。GJIC测定采用荧光漂白恢复法：先将待测细胞培养于36mm的Petri培养皿中约48h，待细胞单层生长时用CDFA染色约15min，用ACAS|570共聚焦显微镜发射激光将待测细胞内的荧光漂白，再动态测定被漂细胞内荧光的恢复率，以此来测定细胞间的通讯水平。

2 结果

表1Wistar鼠正常大肠与DMH

诱发大肠癌组织中Cx43的表达

总例数（30）阴性弱阳性强阳性正常鼠大肠组织3（10.0%）11(36.7%)16(53.3%)DMH诱发大肠癌组织18(60.0%)10(33.3)2 (6.7%)

χ2检验：P<0.05

其中9例癌组织标本Cx43 和E|Cad均阴性，病理分析显示这些肿瘤组织的分化度较差。结果显示从正常鼠大肠上皮细胞转变成癌细胞的过程中伴有Cx43和E|Cad的丢失或表达低下，二者均缺失的癌细胞恶性度较高。

大肠癌细胞间GJIC水平均明显低于鸡胚肺上皮细胞，生长速率较高的Lovo细胞和HT|29细胞，GJIC水平较生长较慢的HR细胞低。表2 Wistar鼠正常大肠与DMH诱发大肠癌组织中E|Cad的表达表3各细胞株漂白后8min的荧光恢复率

3 讨论

正常细胞间主要依靠缝隙连接、桥粒连接和紧密连接相联系，其中缝隙连接尚具有细胞间通讯（GJIC）功能，GJIC在细胞间的信息分子传递、细胞代谢和细胞间密度抑制中起着重要作用，肿瘤细胞失去正常的密度抑制而无限增殖，可能与癌细胞与周围细胞间通讯障碍有关[1,2]。本文对GJIC的定量检测证实大肠癌细胞间GJIC明显低于正常细胞，且生长速率越高的癌细胞，GJIC水平越低。提示大肠癌存在GJIC水平的低下与癌的发生发展有关。至于构成肿瘤细胞间GJIC的具体信息分子与正常细胞是否存在质的区别尚待研究。

缝隙连接是由相依细胞膜上的连接小体偶合而成，每个连接小体由6个连接子（Cx）组成，常见的Cx 有Cx43、Cx 32和Cx26。肿瘤细胞间GJIC常低下或完全缺如，这可能由Cx的表达下降或各种Cx比例子失衡所致，有学者用基因转染方法将Cx基因导入Cx缺如的癌细胞并使其表达来恢复GJIC，结果肿瘤细胞的一些恶性表型发生逆转，增殖速率也随之降低[3,4]。本文结果也证实在鼠大肠上皮细胞的恶变过程中存在Cx43的缺失和表达低下，但未能同时测定其它亚型的Cx表达，本文中正常肠组织中Cx43也有阴性，可能这些组织以其它类型的Cx表达为主。

多数正常上皮细胞均有E| Cad的表达，其表达对细胞间的稳定极其重要，有研究认为E| Cad的缺如与肿瘤的转移有关[6,7]，本文的检测结果证实鼠大肠癌E| Cad的表达低下或缺如，且与Cx43的表达相关，二者缺如的癌组织恶性度高，提示两者对细胞稳定与通讯可能有相辅相成的作用。

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