【摘要】 ［目的］ 探讨结肠癌原发灶及其淋巴结转移灶中E钙粘素（E-cad）和β连环素（β-cat）表达的临床意义。［方法］ 采用组织芯片技术，应用免疫组化方法检测81例结肠癌原发灶及其淋巴结转移灶组织中E-cad和β-cat的表达。［结果］ 原发灶及其淋巴结转移灶中β-cat的正常表达率分别为23.46%和4.94%，原发灶中显著高于转移灶(P<0.01)，尤其是高中分化病例，转移灶中异位表达率显著高于原发灶 (45.68%比28.40%，P<0.01)，尤其是管状腺癌；原发灶中β-cat表达强度显著高于转移灶(P<0.01)。E-cad的表达强度在原发灶显著高于转移灶(P<0.01)，尤其是管状腺癌和高中分化病例。［结论］ 低表达E-cad和β-cat及异位表达β-cat的结肠癌细胞可能具有较强的转移能力，更易于发生淋巴道转移。

【关键词】 结肠肿瘤E钙粘素β连环素组织芯片免疫组织化学

Expression of E-cadherin and β-catenin in Primary Lesion with Colon Carcinoma and the Metastatic Lymphonodes

GU Yan-jun1, ZHANG Shi-wu2, SONG Li-xin1, et al.

(1.Department of Pathology, Medical College of Chinese People’s Armed Police Forces, Tianjin 300162, China;

2.Tianjin Tumor Hospital, Tianjin 300060, China)

Abstract: ［Purpose］To explore the clinical significance of expression of E-cadherin and β-catenin in both primary lesion with colon carcinoma and the metastatic lymphonodes. ［Methods］ Immunohistochemical staining of E-cadherin and β-catenin with tissue microarrays was carried out in 81 cases with colorectal carcinoma, including primary lesion and the metastatic lymphonodes. ［Results］ Expression rate of β-catenin in primary lesion and metastatic nodes was 23.46% and 4.94%, respectively. The rate in metastatic lesion was significantly lower than that in primary lesion (P<0.01), especially that in well and moderately differentiated carcinoma. The extopic expression rate in metastatic carcinoma was significantly higher than that in primary lesion(45.68% vs. 28.40%,P<0.01)，especially in tubiform adenocarcinoma. Expression of β-catenin in metastatic carcinomas was significantly lower than that in primary colon carcinomas (P<0.01). Expression of E-cadherin in metastatic carcinoma was significantly lower than that in primary colon carcinoma(P<0.01)，especially in tubiform adenocarcinoma and well and moderately differentiated carcinoma. ［Conclusions］ Colon cancer cells with low expression of E-cadherin and β-catenin, and extopic expression of β-catenin are more invasive and likely to lymphonglaudula metastasis..

Key words: colon neoplasms; E-cadherin; β-catenin; tissue microarray; immunohistochemistry

恶性肿瘤局部浸润和远处转移与细胞间粘附力的降低有关，其中E钙粘素(E-cadherin，E-cad)和β连环素(β-catenin，β-cat) 传导通路具有重要作用。研究发现两者在结肠癌中常出现表达异常，但目前未见关于结肠癌原发灶及其淋巴结转移灶中两者表达关系的报道。本文应用组织芯片技术，免疫组化方法，检测81例结肠癌及其淋巴结转移灶中E-cad和β-cat表达，探讨其表达在结肠癌淋巴转移中作用。

1 材料与方法

1.1 材 料

收集天津肿瘤医院1987~2002年间存档的常规石蜡包埋的具有淋巴结转移的结肠癌组织标本共81例。其中男性41例，女性40例；管状腺癌63例和黏液腺癌18例；高中分化40例，低分化4例；有随访资料者47例。年龄26~77岁，中位年龄48岁。所有患者术前均未接受任何辅助治疗。其中行单纯手术治疗者41例，行手术加化疗者25例，行手术加放疗者11例，行手术加化疗、放疗者4例。每例石蜡标本4μm厚连续切片，用HE染色。

1.2 方 法

将这81 例结肠癌原发灶及其有淋巴结转移的组织蜡块重新切片，进行复习并确诊。为了实验研究的方便和减小定位误差，根据HE 切片，我们对石蜡标本中有代表性的点进行标记，根据标记好的点将这81例结肠癌及其淋巴结转移灶的石蜡标本制作成2个组织芯片。为了防止在打点、切片、染色或免疫组化过程中出现漏点、滑片及掉片现象，每个样本我们均上样两个点。

采用免疫组化SP法在组织芯片上进行E-cad和β-cat染色。鼠抗人E-cad和β-cat抗体和SP试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司。

免疫组化采用专用微波炉进行抗原微波热修复，严格按SP 法操作流程染色。全程实验用已知的阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定

E-cad表达于细胞膜，其标记阳性细胞表现为细胞膜呈棕黄色颗粒着色。

β-cat的表达分别从细胞膜、细胞浆、细胞核三个方面判断，只有胞膜棕黄色颗粒着色者为阳性细胞，而细胞质或细胞核呈棕黄色颗粒着色者为异位表达细胞。

1.4 结果记录

根据Ropponen 等[1]介绍的方法对E-cad和β-cat表达强度进行半定量分类，β-cat的异位表达细胞视为阴性表达细胞。在目镜中装入100目测微网格（Olympus），400×镜下，每个点阵计数1 000个肿瘤细胞，计算E-cad或β-cat阳性细胞百分比。

各病例两组表达强度的判断标准为：阳性细胞>90%者为正常表达(++)，10%~90%者为表达减弱(+)，<10%或完全消失者为阴性表达(-)。

因为β-cat存在异位表达，计数其发生异位表达的例数，计算异位表达率。

1.5 统计学处理

用SPSS10.0 统计软件包进行统计学分析。采用四格表资料的χ2检验进行两组间率的比较；采用两样本资料或配对资料秩和检验进行E-cad和β-cat表达强度的比较。

2 结 果

2.1 E-cad和β-cat在结肠癌原发灶及其淋巴结

转移灶中的表达

所选81例结肠癌原发灶及其淋巴结转移灶中E-cad表达均表现为表达减弱或阴性表达，但其表达强度明显不同，原发灶中显著高于转移灶(P<0.01)，其中6例表现为转移灶中表达强度高于原发灶，见表1。

所选81例结肠癌原发灶及其淋巴结转移灶中均可见β-cat正常表达病例，β-cat可异位表达于细胞质和细胞核，尤其是细胞核。原发灶及其淋巴结转移灶中β-cat的正常表达率则分别为23.46%(19/81)和4.94%(4/81)，原发灶显著高于转移灶(χ2=11.40，P<0.01)；异位表达率分别为28.40%(23/81)和45.68%(37/81)，转移灶显著高于原发灶 (χ2＝5.19，P<0.01)；原发灶中β-cat表达强度显著高于转移灶(P<0.01)，其中11例表现为转移灶的表达强度高于原发灶，见表1。

2.2 E-cad和β-cat在结肠癌原发灶及其淋巴结

转移灶中的表达与临床病理特征关系

所选81例病例中管状腺癌63例，黏液腺癌18例。原发灶中E-cad表达强度在管状腺癌明显高于黏液腺癌(χ2=4.21，P<0.01)，而转移灶中E-cad表达与组织学类型无关。原发灶及其淋巴结转移灶中β-cat的表达强度、正常表达率及异位表达率在管状腺癌和黏液腺癌中均差异无显著性。进一步分析不同组织学类型结肠癌原发灶和转移灶间两者的表达情况，结果显示：管状腺癌E-cad的表达强度在原发灶显著高于转移灶（Z＝-3.97，P<0.01），黏液腺癌中表达强度无明显不同；管状腺癌β-cat异位表达率在转移灶显著高于原发灶(χ2=34.16，P<0.01)，管状腺癌和黏液腺癌中β-cat的表达强度在原发灶均显著高于转移灶(Z值分别为-3.3和-2.28，P<0.05)，结果见表2和表3。

所选81例病例中高中分化者40例，低分化者41例。原发灶中E-cad的表达强度在高中分化病例显著高于低分化病例(Z=-2.68，P<0.01)，转移灶中其表达与肿瘤分化程度无关。原发灶及其淋巴结转移灶中β-cat表达强度与肿瘤分化程度无关。进一步分析不同分化程度肿瘤原发灶和转移灶间两者的表达情况，结果显示：高中分化病例原发灶中E-cad表达强度显著高于转移灶（Z＝-3.13，P<0.01），低分化病例中原发灶和转移灶间E-cad表达强度差异无显著性；高中分化病例原发灶和转移灶中β-cat正常表达率分别为30%(12/40)和5.00%(2/40)，前者显著高于后者(χ2=8.66，P<0.01)，低分化病例中差异无显著性，高中分化病例和低分化病例中β-cat的表达强度在原发灶均显著高于转移灶（Z值分别为-2.38和-3.70，P＜0.05），结果见表2和表3。

2.3 E-cad和β-cat在<